BioTechnicalフォーラム [HEK293 suspension culture]

HEK293 suspension culture

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No.3452-TOPIC - 2014/10/11 (土) 05:56:43 - おお

てもとでもっているHEK293由来のcell line(接着して増殖)を浮遊細胞へとadaptationできたらなあと考えているのですが、どなたか経験がある方、感触や経験など教えてください。
　

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No.3452-12 - 2014/10/20 (月) 15:28:10 - おお

f68があれば血清抜かなくてもある程度は何とかなるんですね。ありがとうございました。

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No.3452-11 - 2014/10/16 (木) 22:39:52 - mon

サンショウウオさん

凝集しますか。申し訳無いです。
私はCa+濃度がDMEMよりやや低いDMEM/F12を使っていたからでしょうか？？
また静置ではなく三角フラスコで130rpmで回転培養しています。

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No.3452-10 - 2014/10/16 (木) 21:03:54 - サンショウウオ

mon様

どうも、以前教えていただいた４％FBS＋0.1%F68 DMEMで、解凍直後の293Fを培養してみたのですが、凝集してしまいました。スフェロイドっぽいものを接着培養に播きなおした後、F68含有培地で培養しなおしても再度凝集してしまいまして。。。。。。。
徐々にF68濃度を上げてやったほうがよかったのでしょうか？

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No.3452-9 - 2014/10/16 (木) 16:17:30 - mon

Freestyle293Fは、血清入り培地＋0.1%PluronicF68とか、自作の安価な無血清培地でも浮遊培養できています。今は古いFreeStyle培地がもらったので使っていません（GlutaMAXのおかげか問題なく増えます）。
PluronicF68を入れると接着細胞用dishでもHEK293細胞は血清入り培地でも接着しなくなりますね。
なので、PluronicF68の濃度を少しずつ上げて継代するとかで、浮遊培養に馴化出来ないかな？？

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No.3452-8 - 2014/10/15 (水) 16:37:06 - サンショウウオ

lifetechnologiesのFreestyle293Fは
Non　treateddishで培養したら凝集がきつかったですorz

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No.3452-7 - 2014/10/11 (土) 18:25:55 - おお

ご経験に基づく話参考になります。ありがとうございました。

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No.3452-6 - 2014/10/11 (土) 17:02:11 - ~

無血清培地で馴化させれば浮遊になりますが、1ヶ月くらいかかります。

HeLaでなら、いきなりスピナーフラスコに移して血清入り培地で培養したことがありますが、増殖がかなり悪くなりました。結局、サスペンション用の亜株に切り替えました。

どちらにしても、接着でのキャラクタライズの意味が残るかは考慮する必要があるでしょう。

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No.3452-5 - 2014/10/11 (土) 09:58:42 - 中西部ポスドク

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC99848/
low serumみたいですね。

http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/R79007
お金が許せば買うのも一つです。

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No.3452-4 - 2014/10/11 (土) 09:33:41 - おお

ありがとうございます。この手の細胞はすでに商品化されてますけど、手元にある今まで使ってきてcharacterizeされている細胞でやりたいのです。

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No.3452-3 - 2014/10/11 (土) 07:52:00 - TK-1

293Tのsuspension line は出回っています。