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(無題) 削除/引用 No.3474-2 - 2014/10/22 (水) 10:12:57 - ~ HeLaとCHOでしかリン酸カルシウム共沈殿法を使ったことがありませんが。 その細胞の性質が分かりませんが、共沈殿無しで培地交換や炭酸ガス濃度の変更等の処理をした場合はDIV10でもそのようなトラブルはないのでしょうか？ DIV10で培養できているという記載がなく、培養自体に問題があることが否定されていません。 また、血清や成長因子を添加していない培地fresh培地としていて、それでダメージを与えてしまっているということはありませんかね。 細胞培養がうまくいっているのであれば、まずは、洗い不足になっていないか気になります。 書かれた通りの操作をすると、ディッシュや細胞の表面についているリン酸カルシウム共沈殿が結構残っていませんか？ 共沈澱が多めに残ると細胞の具合が悪くなったため、私は数回洗っていました。 それと、DNAなしのリン酸カルシウム沈殿で同じ操作をして悪影響がなければ、DNAが汚いという判断もできるかと思います。

リン酸カルシウムでの神経細胞遺伝子導入 削除/引用 No.3474-1 - 2014/10/21 (火) 21:15:40 - m 現在、マウス海馬ニューロン初代培養を行い、リン酸カルシウム法で 遺伝子導入を行なおうとしているのですが、細胞が全滅に近い形になります。 何かアドバイスを頂ければと思い、投稿しました。 DIV10での導入後、DIV14での観察を目指しているのですが、だいたい２日後、DIV12くらいで ニューロンがフラグメント化しだし、形が不明瞭になって死んで行きます。 DIV7以前の導入では、４日後でもそこそこ元気なのですが、DIV10を超えると、 急に死にやすくなります。 ・リン酸カルシウムトランスフェクションは、1時間fresh medium中で行ない、 終了後、10％CO2でインキュベートした培地を加えて、さらに15分インキュベートし、 その後、培地をアスピレートして、元の培地（トランスフェクション前のもの）に戻すという手順で行なっています。 他は、おそらくよくある手法ではないかと思うのですが、 このような実験で、ポイントになる点などないでしょうか？

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