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微小な組織サンプルのホモジェナイズ法 トピック削除
No.3654-TOPIC - 2014/12/12 (金) 11:36:51 - 大学院生
いつも大変勉強させていただいております。

マウスの脳から特定の領域を切り出し、遺伝子発現を調べようとしています。
だいたい1mm角くらいのサンプルになるのですが、
切り出したサンプルが小さすぎて、ピペッティングや研究室にあるホモジナイザーでは
サンプルを潰すことができないため、Trizolを使ってのRNA抽出がうまくいかず困っております。
培養細胞のペレットは似たような大きさでもすぐ溶けたので、油断しておりました。

皆様は小さな欠片をホモジェナイズする際にはどのようにされていらっしゃいますでしょうか?
ご教示いただければ幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.3654-6 - 2014/12/12 (金) 21:34:44 - 大学院生
皆様ご指導ありがとうございます。

研究室にあるのは下記のものでした。
http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/BioMasher/
使ってみたのですが、サンプル片が隙間に入っても潰れずに出てきてしまいました。

ビーズや超音波洗浄器/破砕機はありませんでした。

AP様ご指摘のP1000を使う案は私でもできそうですのでぜひやってみたいと思います。
針を使う事があるのは論文等読んで知っていたのですが、21ゲージの針だとガバガバで
素通りするか、途中で針にくっついてしまうかでダメでした。

Beads Needle 削除/引用
No.3654-5 - 2014/12/12 (金) 16:54:32 - ema
基本Beadsを入れてつぶしています。
http://www.ikedarika.co.jp/catalog/item/1940.html
ジルコニアビーズ3mm3個/tube;硬い組織は5mm1個/tube
http://www.technosaurus.co.jp/categories/view/243

ニードル(21とか23G)を通してつぶす人もいました。

(無題) 削除/引用
No.3654-4 - 2014/12/12 (金) 13:01:25 - AP
ディスポのピペットチップの先端を炙って焼きつぶしたものをpestleにする。
P1000のチップを溶けるまで炙って、チューブの底に押し付けて固めるとジャストフィットのペッスルができます。

(無題) 削除/引用
No.3654-3 - 2014/12/12 (金) 12:07:59 - mon
1.5mLチューブなら超音波(洗浄機)は?

(無題) 削除/引用
No.3654-2 - 2014/12/12 (金) 12:03:25 - おお
ttp://www.funakoshi.co.jp/contents/1482
ttp://www.belart.com/shop/centrifugeware-pestlesgrinders-c-18_113.html

こんなやつ?

ttps://www.wilmad-labglass.com/ProductList.aspx?t=5771

上記のやつを電動で回すそうちも。

微小な組織サンプルのホモジェナイズ法 削除/引用
No.3654-1 - 2014/12/12 (金) 11:36:51 - 大学院生
いつも大変勉強させていただいております。

マウスの脳から特定の領域を切り出し、遺伝子発現を調べようとしています。
だいたい1mm角くらいのサンプルになるのですが、
切り出したサンプルが小さすぎて、ピペッティングや研究室にあるホモジナイザーでは
サンプルを潰すことができないため、Trizolを使ってのRNA抽出がうまくいかず困っております。
培養細胞のペレットは似たような大きさでもすぐ溶けたので、油断しておりました。

皆様は小さな欠片をホモジェナイズする際にはどのようにされていらっしゃいますでしょうか?
ご教示いただければ幸いです。

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