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(無題) 削除/引用 No.367-6 - 2012/04/07 (土) 18:39:55 - org qqさんの書いておられるやり方だと、リソソームなどの顆粒が壊れる割合が増しませんかね。陰圧よりはいいですが。ball bearingに相当するようにということであれば、圧力変化はあまりかけないようにするのが良さそうに思います。ただ確かに、27Gを静かに通すだけでは細胞はすかすかとおるだけで壊れません。Dounceタイプのhomogenizerでも同です。 　 それで単純に、もっと細いのにすればよく壊れます。30Gをよく使ってました。30GのはBDから出てます。３０Gでも内径は細胞一個の大きさよりはずっと太いですが、金属の壁にぶつかる回数が増えるからかなと思ってます。bearingのようなものです。私の場合は32Pラベルした細胞で、ディスポでやりたかったので。ただ、いきなりこれを通すと詰まりやすいので、27Gを先に通してばらして、次に30Gを次に通すといい感じで壊れます。

(無題) 削除/引用 No.367-5 - 2012/04/07 (土) 01:17:48 - 偽リア充 サポニンとかジギトニン（生化学用）みたくかなり緩い界面活性剤とかいいんじゃね。ジギトニンはミトコンドリアは外膜はともかく内膜は壊さないっていうのみたことあるよ。でも、そういうの入ってない普通のか、それか低張のバッファーとかにけんだくしてダンスホモジナイザー使って手でつぶせば一応細胞膜は壊れて中身出てくるよ。このときあんまり気合い入れすぎないようにほどほどにやれば、オルガネラはあまりダメージない。少なくとも核やミトコンドリアはほとんど壊れない。超音波やるとたぶん膜構造はぶつぶつに壊れて細かく断片化しさらにそれらが、小胞になるとおもう。昔、呼吸の実験でサブミトコンドリアパーティクルとか作る時に超音波やったから。

(無題) 削除/引用 No.367-4 - 2012/04/05 (木) 22:40:02 - ｑｗ メガネ用の超音波洗浄機にプレートを浮かすとかは駄目ですか？

(無題) 削除/引用 No.367-3 - 2012/04/05 (木) 18:05:29 - qq ＞27Gニードルを通してみたのですが、ほとんど細胞が破砕されません。 ユルユルと通すのではなく、細胞懸濁液を強く吸引し、強く押し出すのです。この時の圧力の急激な変化が、細胞を破砕するのです。 当然ですが、強く押し出し過ぎると、注射針がシリンジから飛んでいき、細胞液が飛び散る可能性があります。予め、24G程度の注射針に通す必要があるかもしれません。 細胞数が10^7/ml程度あると良いと思います。

(無題) 削除/引用 No.367-2 - 2012/04/05 (木) 17:56:16 - ~ ホモジナイザーが使えるのであれば、ディスポのホモジナイザーを使ってはいかがでしょうか。 http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/BioMasher/index.htm http://www.funakoshi.co.jp/node/16430 ディスポならば除染の問題はなくなりますし。

培養細胞の細胞破砕 削除/引用 No.367-1 - 2012/04/05 (木) 11:47:45 - ううう 動物培養細胞から、オルガネラ（ゴルジやエンドソームなど）の構造を維持したままの細胞破砕液を抽出したいのですが、ちょっと教えてください。 これまで、細胞ペレットを等張液に懸濁してEMBL cracker（ball bearing homogenizer)で破砕していました。病原体に感染した細胞から破砕液を調整したいのですが、破砕液は感染性で、EMBLクラッカーは使用後に除染するのが難しいので使いたくありません。 他に破砕液を調整する良い方法はないでしょうか。27Gニードルを通してみたのですが、ほとんど細胞が破砕されません。界面活性剤もオルガネラを壊すので使えません。 何かご存知でしたら教えてください。

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