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Histoneの修飾 トピック削除
No.3714-TOPIC - 2015/01/08 (木) 20:32:53 - 凸
Histones のO-GlcNAc修飾を抗O-GlcNAc抗体でウェスタンで検出しようとしてもシグナルが全然でません。バシッとしたバンドが出ている論文をもとに試しましたがどうにも出ません。なんか論文とかには書いていない特別な注意が必要なのかなあとか最近思っています。どなたか上手く検出できてる人いたら、教えてください。Histonesそのものは検出出来てます。組織から高度に精製したhistonesでも試しましたがバンドでません。
 
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(無題) 削除/引用
No.3714-2 - 2015/01/09 (金) 04:10:38 - おお
その論文はわかりませんが、
ttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3250351/

この論文でO-GlcNAc抗体のアフィニティーはあまり強くなく、化学修飾を施してべつのantigenやビオチンをつけて検出しています。fig3に抗体とのsensitivity の違いが示されています。

ttp://www.pnas.org/content/107/46/19915.full
こちらではその方法をつかってhistoneの糖修飾の検出をしてますね。

レクチンも抗体レベルであふぃにティーは強くないと最初の論文に書いてますが、えられたhistoneフラクションをレクチンでpull downするともしかしたら濃縮できて抗体でも検出できるかもしれません。

あとは単純にECLのキットで検出感度が非常に高いものに変えるか。

Histoneの修飾 削除/引用
No.3714-1 - 2015/01/08 (木) 20:32:53 - 凸
Histones のO-GlcNAc修飾を抗O-GlcNAc抗体でウェスタンで検出しようとしてもシグナルが全然でません。バシッとしたバンドが出ている論文をもとに試しましたがどうにも出ません。なんか論文とかには書いていない特別な注意が必要なのかなあとか最近思っています。どなたか上手く検出できてる人いたら、教えてください。Histonesそのものは検出出来てます。組織から高度に精製したhistonesでも試しましたがバンドでません。

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