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(無題) 削除/引用 No.3792-5 - 2015/01/28 (水) 23:35:04 - 名無し 経験的な印象だけど、Transient>>stableと思っている。余計な蛋白質つくるのは動物細胞にはかなりの負担だから。あまり強く発現しているクローンは、選抜の過程で増殖が遅かったり死滅したりして失われて、結局、ほどほどの発現のクローンが残るんじゃないかな。transientでやったとき、やたら発現が強いときはアーティファクトを見る危険があるので気をつけた方がいい。stableならばとりあえず何クローンか作成して、発現量が内在性のそれとあまりかけ離れないクローンを実験に使うのは重要なところと思う。特に分子間相互作用とかは発現が変な風に強いとアーティファクトを見る危険があるからここはかなり注意してる。ていうか最近はIPしてちゃんと内在性のもので確認するように言われるけど。

(無題) 削除/引用 No.3792-4 - 2015/01/28 (水) 22:25:42 - おお transfectionで難なく入るのであればtransientの方が細胞あたりの発現量がstableより高いpopulationが多く得られると思います。 細胞の特徴、いろいろな事情でtransfectionが難しい場合、stableのほうが高い発現量の細胞を得ることができる場合もあるでしょう。 また、transientで20%ぐらいの細胞に明らかに入って、stableより高い発現があったとしてのこり80%は発現してないとかいう場合、あなたの実験において十分かということも考えないといけないかと思います。

(無題) 削除/引用 No.3792-3 - 2015/01/28 (水) 18:17:54 - ~ 平均すればtransientの方が、stableよりも発現量は高くできるでしょう。 たんぱく質取りが目的であればそれでもいいのでしょうけれども、 生理的な話をするのであれば、transientの中の発現量の低い細胞の影響を どこまで拾う試験なのかを考える必要がありますね。

(無題) 削除/引用 No.3792-2 - 2015/01/28 (水) 17:36:18 - 774R stableはtransientに比べコピー数が少ない場合がほとんど。 あまりにも発現量の多いstableクローンは淘汰される傾向にある。（誘導発現の場合はこの限りではない。） 経験的に細胞1個あたりの発現量はstableは多くないと感じています。 ただし、全ての細胞が発現しているので、培養ディッシュ当たりのタンパク量は悪くないですね。なにより細胞ごとのバラツキが少ないので解釈しやすい。 また、Doxなどを使う誘導発現システムは便利なときがあります。

stabe発現細胞のタンパク質発現量 削除/引用 No.3792-1 - 2015/01/28 (水) 16:29:43 - n stable発現細胞の、目的タンパク質発現量というのは、 transientに発現させた時に比べてどうなのでしょうか？ もちろん、stable発現における入ったコピー数によると思いますが、 transientの方がピーク時にはがっつり発現している気もします。 少し気になっているのですが、その辺はどうなのでしょうか？

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