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ペプチド抗原の透析いりますか? トピック削除
No.3804-TOPIC - 2015/01/30 (金) 21:22:11 - あかね
抗体作製の為のペプチドをKLHにコンジュゲイトしました。
ペプチド末端のシステインとマレイミド活性化KLHを反応させて、互いを結合させたので、プロトコルに従えば、その後に透析することになっています。透析によって、未反応のペプチドの除去やbuffer置換が期待されます。コンジュゲイト際のbufferはリン酸bufferなので、透析なしでそのまま免疫しても問題ない様に思えます。
その場合、未反応のペプチドも免疫されることになりますが、抗体作製の際に問題ありますでしょうか?

ちなみに, conjugation bufferは 20 mM sodium phosphate (pH6.6), 100 mM EDTA, 80 mM Sucroseです。EDTA濃度が高いのが気がかりですが。

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お礼 解決済み 削除/引用
No.3804-4 - 2015/01/31 (土) 16:01:07 - あやね
お二方、コメントありがとうございます。
その後、こちらでも調べまして、ThermoのKLH conjugation kitにEDTAを除く必要があるとの記載がありました。
なので、ちゃんと透析しようと思います。

(無題) 削除/引用
No.3804-3 - 2015/01/31 (土) 14:47:33 - 名無し

EDTA濃いね。注射したときちゃんと血とまるかな?

(無題) 削除/引用
No.3804-2 - 2015/01/31 (土) 08:27:17 - qw
ペプチドをBSAに結合させて、sephadexG75でゲルろ過していたな。
KLHは経験無いです。
そもそも、透析でペプチドが除去できるのか、よく判りません。

ペプチド抗原の透析いりますか? 削除/引用
No.3804-1 - 2015/01/30 (金) 21:22:11 - あかね
抗体作製の為のペプチドをKLHにコンジュゲイトしました。
ペプチド末端のシステインとマレイミド活性化KLHを反応させて、互いを結合させたので、プロトコルに従えば、その後に透析することになっています。透析によって、未反応のペプチドの除去やbuffer置換が期待されます。コンジュゲイト際のbufferはリン酸bufferなので、透析なしでそのまま免疫しても問題ない様に思えます。
その場合、未反応のペプチドも免疫されることになりますが、抗体作製の際に問題ありますでしょうか?

ちなみに, conjugation bufferは 20 mM sodium phosphate (pH6.6), 100 mM EDTA, 80 mM Sucroseです。EDTA濃度が高いのが気がかりですが。

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