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(無題) 削除/引用 No.3834-4 - 2015/02/09 (月) 16:12:51 - 名無し 本来可溶性の蛋白質が発現させたらinsolbleということならばそれは大腸菌がfoldingに失敗したのだとおもう。あるていどの大きさの蛋白質（分子量の小さいペプチドみたいなものじゃないもの）が生物活性を持つには、一応（たとえ部分的にしろ少なくとも活性発現に重要なところは）正しい高次構造をとることはどうしても必要とおもうので、folding に失敗したということは、それが出来てないと考えられるわけで、活性はあまり期待出来ないということになるとおもう。 経験的なものも含めて対策はいろいろあるけど、もともとかなり無理なことさせてるわけで大腸菌の能力的なものとか、その蛋白質の1次構造にもかなり原因があるので、他の蛋白質でうまくいったからこれならいけるみたいには必ずしもならないし、確実なものはないなかなかとおもう。

(無題) 削除/引用 No.3834-3 - 2015/02/09 (月) 04:53:16 - 独り言 Insoluble=凝集体＝不適切な相互作用＝タンパク質の疎水性残基の露出＝タンパク質の変性 まぁ、普通の酵素の活性であれば、変性した状態で保っていると考える方が難しい。

(無題) 削除/引用 No.3834-2 - 2015/02/09 (月) 03:29:53 - おお Insolubleのものはfoldingがうまくいかずアグリゲーションを起こしたものとおもえます。違う理由もあるかもしれませんけど。うまくfoldingしなかった蛋白は活性を持っているといいにくいですよね。 SDSPAGEでは確認できなくてもいくらかはsolubleのfractionにきているかもしれないので、簡便な方法でいいから精製をかまして、あるていどの濃度の蛋白が得られるなら活性が見れるかもしれません。

タンパク質について 削除/引用 No.3834-1 - 2015/02/09 (月) 01:43:02 - jin 先日大腸菌を用いてタンパク質誘導を行い SDS-PAGEにて蛋白の確認を行いました。 その結果 solubleでのタンパクの確認はできず Insolubleで目的蛋白の発現が確認されました。 その後活性測定を行ったところ 思ったような(先行研究通りの)結果が出ず その原因がsolubleでの発現がみられなかった為であると いうアドバイスを頂きました。 solubleとInsolubleでの蛋白の発現と その活性についてどのような関係があるのでしょうか。 勉強不足な点もあると思いますがよろしくお願いいたします。

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