全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.3885-5 - 2015/02/24 (火) 08:28:11 - tora 皆さんご意見ありがとうございます。 確かにdNTPやプライマーは残ってますよね。 納得です。

(無題) 削除/引用 No.3885-4 - 2015/02/23 (月) 23:50:39 - おお そう言うプロとコールでは過剰にdNTPをいれているので、反応溶液中にフリーのdNTPがたくさん残っているはずです。理論的には、RNAを含まない溶液でcDNA合成反応をさせたものまたはRNAいれて反応してない物をreferenceとしないと、はかれないということになりますけど、ベースラインが高すぎて正確にはかれないでしょう。未重合のdNTPを除くならバッファーのreferenceではかれるとおもいます。 もうひとつはRT用バッファーにはDTTなどのUVの吸収に影響するものもふくまれています。特に酸化型は260nmに強い吸収があるようなので、そう言う溶液で測っても当てにならないでしょう。

(無題) 削除/引用 No.3885-3 - 2015/02/23 (月) 22:43:45 - AP 逆転写後にフリーのヌクレオチドやプライマーを除去するような精製をした上で濃度測定をしたのでしょうか。あるいは、ssDNA特異的な蛍光色素(おそらくそういうのはまだないはずですが)などを利用して測定したのにのでしょうか。 逆転写後反応にはDNAと同様の吸光特性をもつ基質のdNTPやプライマーがたっぷり入っていますが。

(無題) 削除/引用 No.3885-2 - 2015/02/23 (月) 22:35:55 - qw スイッチを押すと数値が出てくるけど、数値はあなたの期待しているものとは異なる場合もある。ということかも。 特に、 ＞逆転写反応後のssDNA濃度が360マイクロg/mlになっていました。 は、「その吸光度がすべてssDNAに由来すると仮定すれば、そうなる」ということであって、ｄNTPの残りなど考慮に入れないということ。 mRNA（ではなくて、totalRNAのようだけど）が30ug/mlなのに逆転写して12倍できちゃ変でしょ？

RNAの抽出から逆転写反応後の核酸濃度の変化 削除/引用 No.3885-1 - 2015/02/23 (月) 21:38:09 - tora 質問です。 タイトルの通りなのですが、mRNA抽出時のRNA濃度が30マイクロg/mlで、 逆転写反応後のssDNA濃度が360マイクロg/mlになっていました。 ちなみにRNA濃度測定時の260/280は1.63で、260/230は1.18でした。 RNAの抽出にはAurum Total RNA Mini Kitを使用しました。 純度が低いとこのようなことになるのでしょうか？ 皆さんのご意見をお願いします。 補足が必要な点があれば教えて下さい、よろしくお願いします。

全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---