Bio Technical フォーラム

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CRISPRのタイピング トピック削除
No.3913-TOPIC - 2015/03/03 (火) 20:49:22 - まっさん
CRISPRシステムを使って、ノックアウトマウスを作製しました。
そのゲノムに関してCRISPRのターゲット配列の近辺をダイレクトシーケンスで確認しました。
その結果を波形で確認しましたが、deletionを起こしているため、波形が重なってしまい、欠損の場合ヘテロとホモの区別が付きません。
クローニング以外で、クリアーに判別する方法はないでしょうか?

以前ヒトの遺伝子変異を識別するために用いていたnovoSNPを使いましたが、今回のノックアウトマウスのデータではうまく識別できていません。
波形が3つ出たりと、何が起こっているか不明です。
シーケンスデータを簡便に判定する方法がございましたら、ご教授頂けましたら幸いです。

よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.3913-3 - 2015/03/04 (水) 01:40:42 - おお
その周辺の配列でからPCRがかけれるなら、PCRproductをPAGEなどで流してサイズで分けてからそれぞれ配列を読めばどうかな。
F Rからのシーケンスでバンドの乱れが始まる点からだいたいどの程度の範囲でdeletionが起こっているかわかっているわけですよね。
まぁベクター二クローニングして読んでいってもそんなに手間ではないでしょうけど。

(無題) 削除/引用
No.3913-2 - 2015/03/03 (火) 23:08:00 - TK-1
いろいろ考えるくらいならさっさとクローニングしてシークエンス。

CRISPRのタイピング 削除/引用
No.3913-1 - 2015/03/03 (火) 20:49:22 - まっさん
CRISPRシステムを使って、ノックアウトマウスを作製しました。
そのゲノムに関してCRISPRのターゲット配列の近辺をダイレクトシーケンスで確認しました。
その結果を波形で確認しましたが、deletionを起こしているため、波形が重なってしまい、欠損の場合ヘテロとホモの区別が付きません。
クローニング以外で、クリアーに判別する方法はないでしょうか?

以前ヒトの遺伝子変異を識別するために用いていたnovoSNPを使いましたが、今回のノックアウトマウスのデータではうまく識別できていません。
波形が3つ出たりと、何が起こっているか不明です。
シーケンスデータを簡便に判定する方法がございましたら、ご教授頂けましたら幸いです。

よろしくお願いいたします。

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