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ルシフェラーゼを発現する生きた細胞をFACSでソート トピック削除
No.3955-TOPIC - 2015/03/21 (土) 17:54:30 - あべる
ルシフェラーゼをレポーター遺伝子として細胞に発現させておいて、
細胞膜透過型のルシフェリンなどを添加後にFACSで発現細胞を
ソーティングすることはできるのでしょうか?

励起が必要ないように思いますが、もしやっている論文などご存知でしたら教えていただけると幸いです。よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.3955-4 - 2015/03/23 (月) 10:17:12 - あべる
ご回答ありがとうございました。

monさん
lucだとFACSでは感度が十分ではないとのこと、理解致しました。このGeneBlazerっていうのも、なかなか面白いですね。

Yosshyさん
nano-Lanternの情報、ありがとうございます。実験の目的はおおよそそんな感じなので、こちらも検討させて戴きます。

どうもありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.3955-3 - 2015/03/23 (月) 07:54:58 - Yosshy
ルシフェラーゼの発光だけでは微弱すぎてFACSでの解析は困難でしょう。
ただし、阪大の永井さんが作ったnano-Lanternのように、lucの発光エネルギーをBLETで高効率に蛍光タンパク質に移して発光させるプローブであれば、発光の強度が非常に大きいだけでなく、蛍光タンパク質そのものも含んでいるので、FACSで簡単に解析できます。
 おそらく、lucが明るく光ってくれて、かつ光り方が均一な遺伝子導入細胞を準備して、移植実験などを想定しておられるのだと思いますが、この目的にnano-Lanternは非常い快適に使えていますので、ご一考されてはいかがでしょう?

(無題) 削除/引用
No.3955-2 - 2015/03/22 (日) 09:32:19 - mon
luciferase sortingでググると、以下を見つけました。
https://tools.lifetechnologies.com/downloads/F-13275_GeneBLAzer_Poster.pdf
luciferaseでの検出は、FACS sortingの感度と試薬コストが現実的で無いようです。

ルシフェラーゼを発現する生きた細胞をFACSでソート 削除/引用
No.3955-1 - 2015/03/21 (土) 17:54:30 - あべる
ルシフェラーゼをレポーター遺伝子として細胞に発現させておいて、
細胞膜透過型のルシフェリンなどを添加後にFACSで発現細胞を
ソーティングすることはできるのでしょうか?

励起が必要ないように思いますが、もしやっている論文などご存知でしたら教えていただけると幸いです。よろしくお願いいたします。

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