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(無題) 削除/引用 No.396-6 - 2012/07/03 (火) 23:00:40 - TS それこそlonzaに聞いたら歓迎してくれるのでは？

siRNAの遺伝子導入 削除/引用 No.396-5 - 2012/07/03 (火) 13:48:00 - 天草知ろう AmaxaのNucleofectorの標準プロトコールでHL-60細胞にsiRNAの導入を試していますが、細胞がほとんど死んでしまいました。成功された方がいらっしゃいましたら、アドバイスをお願いします。

(無題) 削除/引用 No.396-4 - 2012/04/13 (金) 22:07:00 - masamune ありがとうございます。 PEI Max、初めて知りました。 購入して試してみようと思います。これならランニングコストを大幅におさえられます。

(無題) 削除/引用 No.396-3 - 2012/04/12 (木) 04:37:28 - ab だいたい実験する前に、DNA/reagentの比率をふって一番よい条件を探すのですが、概してDNAの量が多い方が発現量が多いです。また細胞毒性も強くなります。 reagentの量を減らしても大丈夫かは、一度自分で条件検討をした方が確実ですが、DNA量はそのままで、reagentの量を減らせば、導入効率は低くなります。 どうしてもお金を節約したい、ということならPEIでもリン酸カルシウムでも、293T細胞なら十分導入できます。リン酸カルシウム法はラボに普通にある試薬でできるので簡便ですが、細胞によっては入りにくいこともあります。またshRNAの導入に使えるかはわかりませんが。

(無題) 削除/引用 No.396-2 - 2012/04/11 (水) 23:26:03 - たま HEK293Tでしたら、lipofectamine2000ではなく、PEI Maxを使用しています。 lipofectamine2000の導入効率を8-9割とすると、PEIでの導入効率は7-8割です。 私の興味あるタンパク質の発現量はむしろPEIで行った方が多い気がします。 ランニングコストはlipofectamine2000の数千分の1です。

lipofectamineの使用量 削除/引用 No.396-1 - 2012/04/11 (水) 22:20:02 - masamune 今年に入ってから、培養細胞を扱う実験を始めたものです。 細胞はHEK293Tで、プラスミドやsiRNAの導入にlipofectamine2000を使用しています。 トランスフェクションの際、DNAあるいはsiRNAとlipofectamineの比が重要ということはわかったのですが、トランスフェクションを繰り返すと、それだけでかなりのランニングコストになります。 皆様にお伺いしたいのは、lipofectamineをマニュアルに書かれている量よりも減らして使うことができるかということです。 （例えば96wellでは、DNA200ng、lipofectamine0.5μLですが、96well分アッセイすると、一回の実験で50μLのlipofectamineを使うことになりますが、この時のlipofectamineの量を減らすことができないか。） よろしくおねがいします。

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