Bio Technical フォーラム

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ELISA reader トピック削除
No.4020-TOPIC - 2015/04/17 (金) 07:33:26 - おお
ELISA reader (microplate reader)でプレートのふたをしたままで測りますか?
 
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No.4020-18 - 2015/04/21 (火) 15:12:52 - サンショウウオ
タバコの煙吹きかけて泡を消すって人が昔いたな。。。

(無題) 削除/引用
No.4020-17 - 2015/04/21 (火) 14:35:23 - fj
TMBが水道水で発色するのって、あれなんででしょうね。
塩素?
ご存知のかたいますか?

(無題) 削除/引用
No.4020-16 - 2015/04/21 (火) 13:12:01 - おお
ありがとうございました。有用な情報が得られました。

(無題) 削除/引用
No.4020-15 - 2015/04/21 (火) 13:07:33 - かんちゃん
通常のサンドイッチELISA(biotin標識抗体、ストレプトアビジンHRP、TMB発色)では問題なかったです。
発光系などでは試していません。

TMBは水道水で発色するので、消毒用エタノール希釈は水道水ではなく蒸留水を使ってました。

(無題) 削除/引用
No.4020-14 - 2015/04/21 (火) 07:24:05 - おお
>[Re:13] かんちゃんさんは書きました :
> 泡を消すときに、消毒用エタノールスプレーをプレートから30cmぐらい離してスプレーしてました。
> 消毒用エタノールスプレーならたいていのラボにありますし、きれいに泡が消えてくれます。
> 吸光度への影響もそれほどありませんでした。
> (バブルがある状態で測定した方が、数値への悪影響が大きかったです)

ありがとうございます。何のアッセイで行ったか教えていただけますか?

バブル 削除/引用
No.4020-13 - 2015/04/21 (火) 05:27:13 - かんちゃん
泡を消すときに、消毒用エタノールスプレーをプレートから30cmぐらい離してスプレーしてました。
消毒用エタノールスプレーならたいていのラボにありますし、きれいに泡が消えてくれます。
吸光度への影響もそれほどありませんでした。
(バブルがある状態で測定した方が、数値への悪影響が大きかったです)

(無題) 削除/引用
No.4020-12 - 2015/04/17 (金) 23:54:58 - れれ
泡飛ばしの工夫、いろいろあるんですね。うちでは「ピペットでうまく泡とってね」としか言えていませんでした。(これがなかなか難しい。逆にブクブクになったりもして・・・・)ウェルの外側に少しあるのはいいけどとにかく中心部分になければいいとは思っていましたが、エタノールや空気で飛ばす方法を試してみたいです。
ふたつきで測れるのはいいですね。でもどうやって測ってるんでしょう。ふたの内側に水滴とかついてても大丈夫なのでしょうか。いずれにせよ時間ごとに測れますからいいですね。

(無題) 削除/引用
No.4020-11 - 2015/04/17 (金) 23:04:20 - Air
うちでは泡は"空気"で飛ばしています。実験机についている "Air" "Gas" "Vac" 栓の"Air"です。これの名称って日本語でなんと言うんでしょうか? とにかく、この"Air"につないだチューブの先をつまんで放出する空気の量を調節して、サンプルの液体が飛ばない程度の空気を上からかけて泡を飛ばすようにと習いました。

上記システムが使えない時は、P1000ピペットを使って同じように上から空気をかけて泡を飛ばしてます。

(無題) 削除/引用
No.4020-10 - 2015/04/17 (金) 14:04:57 - おお
ありがとうございました。たしかにそれは使えそうですね。bradfordはなんか色が変わらないか不安ですけど。

(無題) 削除/引用
No.4020-9 - 2015/04/17 (金) 13:55:05 - Say
泡は、ものによりけりですが、うちでは最後にエタノールを2マイクロリットル添加して消泡しています。

(無題) 削除/引用
No.4020-8 - 2015/04/17 (金) 12:34:08 - おお
APさんありがとうございました。ものによってはそう言う設定もあるんですね。ちょっとそのマニュアルとかみてみようかなぁとおもいました。

(無題) 削除/引用
No.4020-7 - 2015/04/17 (金) 11:29:09 - AP
うちのプレートリーダー(TECAN)にはプレートタイプの選択のほか、リッド無し有りの選択もあるので、全くありえないことでもないらしい。

(無題) 削除/引用
No.4020-6 - 2015/04/17 (金) 09:19:12 - れれ
ま、確かにそのような方は時々いらっしゃいますね。やさしく教えてあげるか、ほぉっておくか、プレートリーダーがどうやって測定しているのか教えてあげるかですかね。

(無題) 削除/引用
No.4020-5 - 2015/04/17 (金) 09:12:12 - おお
あわはなるだけさけてますが、、、共通のリーダーでよそのラボのひとがはかっていたのでそれをまってると、、、ふたをしたプレートが取り出し口から出てきたり、、、

あとはたぶん経験がないひとだとおもうのですが、ふたにいろいろ書いたプレートをみせると、この状態でどうやって測るのってきかれたり。。。。

(無題) 削除/引用
No.4020-4 - 2015/04/17 (金) 09:01:53 - れれ
試しにふたに黒ペンで●にして測ると「あ、ふたははずさないとダメなんだな」と気がつくと思いますよ。時々ふたにペンでコントロールとか処置群とかメモしておきますが、そのまま測るとめちゃめちゃの値になります。うちはふたをとって、目視でエアーバブルがないことを確認してから測定するように指導しています。バブルも測定エラーになりますから。最初は端っこの使ってないウエルにわざとピペットでバブルを作って測定結果を見せています。

(無題) 削除/引用
No.4020-3 - 2015/04/17 (金) 08:41:02 - おお
そうおもうのですが、意外と蓋をしたまま測ろうとする人がまわりにいるんです。。。
たしかに何か培養していて何時間おきかにプレートリーダーにセットして測る際にコンタミとか考えるんだったらわかるんだけど。。。そうでもないときでも。。。。

(無題) 削除/引用
No.4020-2 - 2015/04/17 (金) 08:08:51 - れれ
うちではふたなしで測ります。ふたをしたままですと正しく測れないことないですか?

ELISA reader 削除/引用
No.4020-1 - 2015/04/17 (金) 07:33:26 - おお
ELISA reader (microplate reader)でプレートのふたをしたままで測りますか?

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