Bio Technical フォーラム

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Alexa546でFACS トピック削除
No.4126-TOPIC - 2015/05/25 (月) 17:15:05 -
LSRIIを使って、FITC、PE、PI、Alexa546で染色したいんですが、これらの同時染色はFluoroviewerを使って確認したのですが、いけそうです。

が、論文ではFlowにAlexa546が使われないのはなぜでしょうか?IFではよく見ますが。
なにか理由はありますでしょうか?あるいはLSRIIには実は使えないとか・・?
教えて下さい!
 
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(無題) 削除/引用
No.4126-3 - 2015/05/26 (火) 00:52:50 - TK-1
すべてのLSRIIにAlx546に必要なレーザーが付いていればできるし、そうでなければできないということでしょう。532nmか561nmのレーザーはお持ちですか。ただ、PEと区別するのは無理でしょう。

(無題) 削除/引用
No.4126-2 - 2015/05/25 (月) 17:55:09 - サンショウウオ
ちょっとFluoroviewerで見てきました
ttps://www.lifetechnologies.com/jp/ja/home/life-science/cell-analysis/labeling-chemistry/fluorescence-spectraviewer.html

R-phycoerythrin(PE)とAF546の蛍光スペクトルがほぼかぶっていましたが。。。この2つを同時に使うのは無理ではないかと思います
画像:http://www.fastpic.jp/images.php?file=8928021975.png

FlowcytometerでAF546を使ったことはありませんが、PIとの同時使用は難しいと思います。

AF546とPIの励起光スペクトルの蛍光スペクトルのかぶり具合をみると、(共焦点顕微鏡での話になりますが)励起光が2つの色素ともかぶるので、励起光を色素毎に分けることも難しく、わたしなら同時使用しないと思います。
また、蛍光の方もピークの交点でカットできるフィルターがあったとしても、PIの蛍光がAF546よりもかなり強いと思うので、AF546の蛍光がPIに埋没しないか心配です。

 

Alexa546でFACS 削除/引用
No.4126-1 - 2015/05/25 (月) 17:15:05 -
LSRIIを使って、FITC、PE、PI、Alexa546で染色したいんですが、これらの同時染色はFluoroviewerを使って確認したのですが、いけそうです。

が、論文ではFlowにAlexa546が使われないのはなぜでしょうか?IFではよく見ますが。
なにか理由はありますでしょうか?あるいはLSRIIには実は使えないとか・・?
教えて下さい!

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