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(無題) 削除/引用 No.4129-6 - 2015/05/26 (火) 15:29:18 - tet 問題のマウスは産仔数が少なく、できるだけ実験に使用したいのですが… おおさんのおっしゃる通り、一度DNA量を減らしてやってみて、だめなら諦めようと思います。 皆様、ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.4129-5 - 2015/05/26 (火) 14:39:36 - 7744 私も、尻尾切り直すところからやっても、なぜかダメなやつはやはりダメだったりすることはありますね。 一つのサンプルだけ何回やってもノンスぺ出たり。 そういう時はそういうもんだと割り切って、実験や交配には用いないようにしています。 大抵の場合、その一匹にそれだけの時間と労力をかける意味が全くないので・・・

(無題) 削除/引用 No.4129-4 - 2015/05/26 (火) 13:52:32 - おお DNA量下げた方がよかったりするよ。

(無題) 削除/引用 No.4129-3 - 2015/05/26 (火) 12:54:44 - tet 毎回組織のサンプリングをし直しています。 一番最初に行った耳パンチでのPCRは、いつもの条件で失敗したあと、DNA量を5倍にしてやり直し、それでもだめでサイクル数を増やしたりもしましたが、失敗でした。 その後、尻尾を２回採取してそれぞれDNA抽出していますが、どちらもバンドは出ていません。

(無題) 削除/引用 No.4129-2 - 2015/05/26 (火) 12:26:02 - AA 何度もやってみた、というのは 耳をパンチしなおしてアルカリ処理しなおした、 ということでしょうか？ 私もアルカリ処理でジェノタイピングをしますが、 ダメなサンプルは何をしてもダメなことが多く、 結局DNAを用意し直すのが一番早いです。

特定マウスだけGenotypingのPCRがうまくいかない 削除/引用 No.4129-1 - 2015/05/26 (火) 12:01:23 - tet TGマウス（ホモ）をCreマウス（Cre+、おそらくホモ）と掛け合わせて、その子供のGenotyping（Cre+かCre-か）をしています。 通常は耳パンチの組織片をアルカリ処理し、それをPCRにかけていますが、あるマウスだけCreのバンドもインターナルコントロールのバンドも出ません。これまで、耳パンチで１回、尻尾で２回やってみましたが、同時に行った他のサンプルのバンドはきちんと出るのに、このマウスのみ何度やっても全くバンドが出ない状態です。親マウスは、これまでの繁殖歴から考えるとおそらくホモなので、このマウスはCre+である可能性が高いのですが… 一応、nano dropでDNA濃度も測定してみましたが、単なるアルカリ処理なので純度は低いものの、問題ないと思われる量（350ng/uL程度）ありました。 このようにPCRが特定マウスだけうまくいかない原因として何が考えられるでしょうか？また、アドバイスがありましたらよろしくお願い致します。

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