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(無題) 削除/引用 No.4143-17 - 2015/06/10 (水) 19:08:41 - Wesユーザー Wesを使用しています。　サリーちゃんのパパさんも記載されていますが、メンブレンを使用したものと比べてWesのほうがいいデータがでるものもあれば、検出に苦労するものもありますね。ただ、条件検討は非常に楽なので、それさえ決まってしまえば非常にパワフルな機械だと思います。 導入当初は情報があまり少なかったのですが、R&Dなどが専用の抗体の販売をはじめたので、情報は今後増えるんじゃないですかね。 ちなみにスループットですが、25サンプルを3時間で測定できるので、うちのラボでは十分すぎるスループットです。

(無題) 削除/引用 No.4143-16 - 2015/06/06 (土) 01:49:09 - protein サリーちゃんのパパさん、 タンパク量に関して教えていただきありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.4143-15 - 2015/06/03 (水) 17:28:01 - AbAb サリーちゃんのパパさん ありがとうございます！ ユーザーの生の声が聞けて大変参考になりました。詳細をメーカーと詰めて、検討したいと思います。

(無題) 削除/引用 No.4143-14 - 2015/06/03 (水) 17:01:47 - サリーちゃんのパパ 試薬の不具合はあまりないと思います。 今年の初めに、製造上のトラブルがあったようで、試薬の供給が遅れていました。（まだ、現在でも遅れぎみです） 試薬を国内在庫で持っていないので、注文から3週間くらいかかるところはなんとか改善してもらいたいところです。 機器は、導入当初に何度か不具合がありましたが、都度改善してもらい、現在は不具合らしい不具合は起きていません。今はいたって快調です。 サポート体勢ですが、日本のユーザー向けにプロテインシンプルジャパン社を立ち上げており、日本橋のオフィスに小さな実験室もあります。そこにテクニカルサポートをしてくれる方がいらっしゃいますので、大手ほど手厚いサポートはできないにしても、いろいろ相談にはのってもらえます。

(無題) 削除/引用 No.4143-13 - 2015/06/03 (水) 13:41:07 - AbAb サリーちゃんのパパさん ありがとうございます。とても参考になります。 機器や試薬などの不具合が起きたことありますでしょうか？また、その場合や不明な点がある場合のサポート体制などはいかがでしたでしょうか？ メーカーがマイナーなため、申し訳ないのですが少し不安に思っています。

(無題) 削除/引用 No.4143-12 - 2015/06/03 (水) 08:32:21 - サリーちゃんのパパ > 横から失礼します。PeggySueだとロードする蛋白がかなり少なくても検出可能みたいな話を聞いたことがあるんですが、そのあたりご存知でしょうか。 それはボリュームのことでしょうか？ それともタンパク量のことでしょうか？ ボリュームでしたら、１検体5uL必要です。ただし、何cycleも同じサンプルをロードすることが可能なので、8cycleまでそのボリュームでいけます。 実際にキャピラリーにロードされるボリュームは、数十nLです。 タンパク量に関しては、例えばcell lysateや組織のホモジネートなどは、2ug/uLくらいの濃度のサンプルが推奨されています。もちろん、精製されたタンパクなどでは、その限りではないです。 感度に関しては、なかなか表現しずらいです。私のところの通常のWBは、他よりもまあまあ感度が良いようなので、それと同等という結果でしか申し上げられないところです。 オリジナルの結果自体は、液クロのチャートのような図で示されますので、かなり弱いシグナルでも見れるといえば見れますが、バックのシグナルに埋もれているようなものを見ることがはたして意味のあるところかどうか。 ダイナミックレンジが広いというのも、上のほうに広いということで、強いシグナルでもサチュたりしないで定量できます。下の方は、上記のとおりです。

(無題) 削除/引用 No.4143-11 - 2015/06/03 (水) 05:26:40 - protein 横から失礼します。PeggySueだとロードする蛋白がかなり少なくても検出可能みたいな話を聞いたことがあるんですが、そのあたりご存知でしょうか。

(無題) 削除/引用 No.4143-10 - 2015/06/02 (火) 22:51:41 - サリーちゃんのパパ > キャピラリーの自作とかでもない限り。 それは、無理ですね。（笑） ノウハウがいっぱい詰まったキャピラリーなので。 結構、他の試薬もこの機器用に設定されており、汎用のもので使えなくはないのですが、データが汚くなったりします。 金額だけ考えたらアカデミアでの使用は難しいでしょうね。あるところにはあるみたいですけど。 一度使えば良さはわかりますので、企業の方なら。。。

(無題) 削除/引用 No.4143-9 - 2015/06/02 (火) 19:51:43 - 独り言 > > > ざっくり、１検体あたりのキャピラリーのお値段が1000円くらいです。 やっぱり、今の私には無理そう。。。。。 キャピラリーの自作とかでもない限り。

(無題) 削除/引用 No.4143-8 - 2015/06/02 (火) 18:02:30 - サリーちゃんのパパ > ちなみに本体を買ったとして、１サンプルあたりのランニングコストはどのくらいになるのでしょう？抗体は普通のウエスタンよりも少量で済むっていることなのでしょうかね？でもキャピラリー代がかかりそう。 > > ざっくり、１検体あたりのキャピラリーのお値段が1000円くらいです。その他の試薬は、通常のWBと変わらないくらいではないでしょうか。必ず1cycle単位（1marker+11samples)での測定となりますので、サンプル数がその倍数でなければ空運転のキャピラリーがでてしまい、もったいない状況もあります。 抗体は、サンプルのアレンジにもよりますが、通常のWBで使用する量を超えることはないかと思います。 サンプル量も、Peggy SueやSally Sueのように何cycleかを回して違う抗体で検出のようにする場合は、同じポジションからサンプリングできるので、かなり少なくて済みます。

(無題) 削除/引用 No.4143-7 - 2015/06/02 (火) 17:21:29 - 独り言 知らない間にすごそうなものができているんですね。 >[Re:5] サリーちゃんのパパさんは書きました : > 定量性と再現性は、とてもいいです。ダイナミックレンジも広いです。 > 試薬をセットするだけで全て自動で測定してくれるので、サンプルの種類が少なく、抗体の種類が多いときは重宝します。 ちなみに本体を買ったとして、１サンプルあたりのランニングコストはどのくらいになるのでしょう？抗体は普通のウエスタンよりも少量で済むっていることなのでしょうかね？でもキャピラリー代がかかりそう。

(無題) 削除/引用 No.4143-6 - 2015/06/02 (火) 17:02:05 - サリーちゃんのパパ あと、具体例は挙げられないのですが、メンブレンでダメだったものをこちらでうまく検出できたことはあります。その逆もあります。 いずれも、それぞれの原理に基づいて考えれば当然の事例ではあります。 ストリッピングやNative-PAGEもできませんし、シグナル部分を取り出して質量分析に持っていくこともできません。

(無題) 削除/引用 No.4143-5 - 2015/06/02 (火) 16:55:35 - サリーちゃんのパパ 定量性と再現性は、とてもいいです。ダイナミックレンジも広いです。 試薬をセットするだけで全て自動で測定してくれるので、サンプルの種類が少なく、抗体の種類が多いときは重宝します。 また、各キャピラリーは独立しているので、サンプルの配置順を気にする必要がありません。さらに、測定条件さえ同じならば、今日測定した結果と１年後に測定した結果を比較することも可能です。 感度は、通常のWBと同等くらいです。 ただし、スループットは悪いです。 おそらく金額からするとWESを想定されていると思いますが、1cycle(max 11samples)ずつしか測定できないので、解析が終わるまで次の測定にいけません。（おおよそ7時間/11samples) Peggy SueやSally Sueなら、8cyclesを連続で測定できるので、88検体を夕方にセットすれば、翌日のお昼には全ての結果が出ています。その間、実験者は何もすることがないので、人手ははぶけます。

(無題) 削除/引用 No.4143-4 - 2015/06/01 (月) 15:40:31 - AbAb あかねさん 私が所属する組織では、毎日大量に評価するので、1000万円台の機器ならそれほど高いとは思いません（本当に時間短縮や再現性に優れているのであれば）。 やはり使っている人はまだ少ないのでしょうか…。

(無題) 削除/引用 No.4143-3 - 2015/06/01 (月) 13:18:49 - あかね ぜひ使ってみたい、と思ってましたが、 装置の金額をみて唖然としました。。。。 http://www.wakenyaku.co.jp/ctg/src.php?v=V5022

mi@gaga.com 削除/引用 No.4143-2 - 2015/06/01 (月) 13:00:59 - あかね これ、知りませんでした。 すごいシステムですね！

ProteinSimple 社の Simple Western 削除/引用 No.4143-1 - 2015/06/01 (月) 12:50:30 - AbAb どなたか ProteinSimple 社の Simple Western をご使用のかたいらっしゃいませんでしょうか？ たまに論文や学会で使用している報告を見かけるようになってきましたが、使用感やサポート体制が良いかなど、ユーザーとしてのご意見を教えていただければ嬉しいです。 例えば、メンブレンでだめだったものがうまくいくとか、その逆とか、そのような例はしばしばあるものでしょうか？ よろしくお願いします。

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