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Hela細胞の継代で失敗します トピック削除
No.4144-TOPIC - 2015/06/01 (月) 16:11:15 - ハル
理工学部4年のハルといいます。
大学で研究室に入り、細胞の培養の練習から始めるということで、Hela細胞の培養の練習をしています。
最初の頃は上手く継代できていたのですが、最近継代して2日置いておいたところ、黒い雑菌のようなものがたくさん100mmdishのなかにあり、細胞も剥がれて死んでいました。
また、新しくHela細胞を解凍し、60mmdishで継代をはじめたところ上手くいったのですが、100mmdishに継代して2日置いておいたら、今度は茶色い塊のようなものがたくさんできていて、PBSで洗うと細胞と共にシートのようにペロンと細胞ごと剥がれてしまいました。

これらの原因が何なのかもしわかる方がいらっしゃいましたらご教授願います。
よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.4144-5 - 2015/06/02 (火) 10:30:49 - ハル
やはり、コンタミですか…。
先輩にも話をして、しっかり対処しようと思います。
詳しく説明してくださりありがとうございます。
なかなか慣れませんが、頑張りたいと思います。

ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.4144-4 - 2015/06/01 (月) 18:51:18 - おお
コンタミ...

肉眼で黒い雑菌とか、茶色い、、、とかだとそうとひどくなってから気がついたってきが、、、

手持ちの培地とかベンチのなかとか、インキュベーターとかいろいろなところに飛散しているかもしれません。。。

まあこれも経験ですから、よく観察してなるべく初期に気づいて対処できるようにしてください。

(無題) 削除/引用
No.4144-3 - 2015/06/01 (月) 16:44:25 - ats
また、凍結細胞自体に微量にコンタミしていて、数日培養すると顕在化することもあります。

(無題) 削除/引用
No.4144-2 - 2015/06/01 (月) 16:43:00 - ats
ゴミみたいなものは細菌ですか?顕微鏡で強拡大で確認してください。
色・時間からすると麹菌・酵母かな?
先輩、指導者等に聞きましょう。
次に何がコンタミの原因か判定しましょう。手(技)か試薬か?
指に怪我しているなら雑菌の宝庫なので手袋を着用。
ピペット等はディスポでしょうか。
試薬なら、培地、洗浄液(PBS)、トリプシン液あたりでしょうか。
培地のみ、培地+PBS、培地+トリプシン液、を培養しコンタミがないか調べてください。判明した原因は廃棄します。
希に、インキュベーター内の汚染、あるいは他の汚染されたdishから飛んでくることもあるようです。

Hela細胞の継代で失敗します 削除/引用
No.4144-1 - 2015/06/01 (月) 16:11:15 - ハル
理工学部4年のハルといいます。
大学で研究室に入り、細胞の培養の練習から始めるということで、Hela細胞の培養の練習をしています。
最初の頃は上手く継代できていたのですが、最近継代して2日置いておいたところ、黒い雑菌のようなものがたくさん100mmdishのなかにあり、細胞も剥がれて死んでいました。
また、新しくHela細胞を解凍し、60mmdishで継代をはじめたところ上手くいったのですが、100mmdishに継代して2日置いておいたら、今度は茶色い塊のようなものがたくさんできていて、PBSで洗うと細胞と共にシートのようにペロンと細胞ごと剥がれてしまいました。

これらの原因が何なのかもしわかる方がいらっしゃいましたらご教授願います。
よろしくお願いします。

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