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(無題) 削除/引用 No.4191-3 - 2015/06/18 (木) 16:27:53 - 7744 マウスの場合ですが、私はいつもダイレクトシーケンスでタイピングしています。 最終的にはPCRでタイピングできるようにしますが、最初は常にシーケンスです。 indeのタイプによってはフレームシフトが起きていない場合もあるので。

(無題) 削除/引用 No.4191-2 - 2015/06/18 (木) 15:38:50 - asan 酵素のみだとT7E1 assayというものがNEBで販売されてますが、結構条件にセンシティブで面倒です。 色々やった結果、一番手っ取り早いのはエンドWBできる抗体でwesternするとか、条件検討用ならばofftargetとかを取りあえず気にしないで、制限酵素サイト近くでNHEJが起きるように設計するとかでPCR-rflpとかをする方が良いという結論になりました。 必要であれば増幅アンプリコンをバルクで大腸菌に形質転換して、数コロニーをシーケンスを読むなどのほうが確実です。

CRISPR-CAS9のゲノミックDNA編集評価 削除/引用 No.4191-1 - 2015/06/18 (木) 10:42:44 - pipedo これから研究室で僕がCRISPR-CAS9のゲノミックDNA編集実験を立ち上げることになりました。プラスミドはアドジーンより購入予定です。 早速の質問で恐縮ですが、プラスミドを遺伝子導入後にピューロマイシンで薬剤選択しますが、その薬剤抵抗性クローンいくつかのゲノミックDNAの編集度合いを見るためにミスマッチ特異的な制限酵素キットで評価するようなのですが、これをキットではなくて酵素のみ購入して自作で行われてる方はいらっしゃいますか？もしそのような方がいらっしゃれば、情報の共有をしていただけないでしょうか？どうぞよろしくお願い致します。

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