お世話になります。MSCと申します。宜しくお願い致します。
これからマウス骨髄より採取したMSCsを培養し、その後、骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞への分化誘導を行う予定です。
質問は、軟骨細胞を誘導する際に、TGF-beta3を加えるプロトコルと、BMP-2を加えるプロトコル、その両者を加えるプロトコルが散見されます。どちらもTGF familyですので同じ効果かと思ったのですが、両方を加えることでsynergisticな作用があるとも書かれている論文がありました。
ご経験がおありの方がいらっしゃいましたら、プロトコルをシェアしていただけないでしょうか？
現在MSCは、10% FCS in alpha MEMで培養しています。
予定では、その後、trypsin-EDTAで細胞を剥がした後、培地で中和し、15 ml tubeに入れ、遠心後に上清をのぞき、ペレットをchondrocytes inducing mediaで再度懸濁し、もう一度遠心する予定です。できたペレットのまま数週間培養予定です。（3-4日間隔で培地交換します）
chondrocytes inducing mediaとして、10% FCS in alpha MEMに50 ug/ml アスコルビン酸、5 nM beta-グリセロリン酸、そこへTGFbeta3かBMP-2を加えようと思っています。
どちらでもいいのかもしれませんが、コメントをいただけますと幸いです。 |
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