Bio Technical フォーラム

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iPS細胞作製誤差 トピック削除
No.4297-TOPIC - 2015/07/27 (月) 20:13:36 - まさ
いつも勉強させてもらっています。

私は現在iPS細胞を作製するような実験を行っています。
エレクトロポレーション法によってマウスの繊維芽細胞にエピゾーマルベクターを導入することによって遺伝子導入しています。
その際、1回分のポレーションで使う1×10^6細胞をいくつかのwellに均等にまいているのですが、出てくるコロニー数、アルカリフォスファターゼ染色ポジティブコロニー数が毎回wellによってかなりばらついてしまいます。(2〜10倍程度)

懸濁等操作にはかなり気を使っているつもりなのですが、このようにコロニー数がばらつく原因を同じような実験をやっておられる方に指摘いただければと思います。
 
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(無題) 削除/引用
No.4297-3 - 2015/07/28 (火) 07:46:36 - dds
遺伝子を導入した細胞全てを1つのプレートに播いた場合でも数回繰り返せば同程度ばらつくと思います。iPS細胞を作製する論文はいろいろ出ていますが、efficiencyをよく見てみればどのくらいのばらつくか理解できると思います。

(無題) 削除/引用
No.4297-2 - 2015/07/27 (月) 20:57:20 - おお
ひとつのwellに何個ポジが出てるのですか?均等になっていて一つのwellに理論上1つなら、数倍のばらつきがあってもおかしくないですが。
まああと細かいところまでみると(細胞の配置など)環境はそれぞれ違ってくるでしょうから。

iPS細胞作製誤差 削除/引用
No.4297-1 - 2015/07/27 (月) 20:13:36 - まさ
いつも勉強させてもらっています。

私は現在iPS細胞を作製するような実験を行っています。
エレクトロポレーション法によってマウスの繊維芽細胞にエピゾーマルベクターを導入することによって遺伝子導入しています。
その際、1回分のポレーションで使う1×10^6細胞をいくつかのwellに均等にまいているのですが、出てくるコロニー数、アルカリフォスファターゼ染色ポジティブコロニー数が毎回wellによってかなりばらついてしまいます。(2〜10倍程度)

懸濁等操作にはかなり気を使っているつもりなのですが、このようにコロニー数がばらつく原因を同じような実験をやっておられる方に指摘いただければと思います。

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