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(無題) 削除/引用 No.4302-6 - 2015/07/31 (金) 17:08:06 - TOKIO あ、質問者さんが使われている12wellやそれ以上小さいwellでは中心に集まる傾向が顕著ですので、6wellにするのも１つです。

(無題) 削除/引用 No.4302-5 - 2015/07/31 (金) 17:07:00 - TOKIO 以前ラボを移った際同じようなことを経験して、いろいろ検討しました。 私は適宜希釈した細胞液を同量ずつ２ml／wellぐらいで播いて、当然播いた瞬間は均一ですが、インキュベーターに入れて次の日はけっこう真ん中に集まっている印象でした。 自分が気づいたのは扉を閉める際の振動で中の棚とメディウムが揺れて、細胞が真ん中に集まっている、ということでした。というのも開けて閉じてを繰り返すだけで真ん中に集まっているのを実際に見たからです。 というわけでしょうもないことが原因だったりします。 私は播いた後、ゆっくりとドアを閉める事で解決しました。 Good Luck!

(無題) 削除/引用 No.4302-4 - 2015/07/31 (金) 11:49:20 - おお ttp://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech/biotechforum.cgi?start=1;mode=view;Code=291 ttp://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech/biotechforum.cgi?start=1;mode=view;Code=2078 ttp://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech2/biotechforum.cgi?start=1;mode=view;Code=1291 ttp://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech2012/biotechforum.cgi?start=1;mode=view;Code=4047 まあしょっちゅう同じことかいている気分だったので。 もし細胞数を調整した培地をdishに直接入れているのであれば振る必要はないかもしれません。 前のラボではうまくいっているようですので、何らかの環境の変化、それによる手順の制約などが原因でしょうけど、それはちょっと実際にそこで実験してないので当たってるかいないかわからないことしかかけません。 dishの素材、インキュベーターのトレイの形状などの違いで比較的対流が起こりやすいのかもしれませんし、もしかしたらインキュベーターが気づかない程度、何らかの要因で(外的要因か内的要因かわかりませんが)振動しているかもしれません。 dishにまく培地の量を減らして細胞が底に到達する時間を短くするといくらか解決するかもしれません。 あとはこまめにチェックして細胞がそこに到達しているけど接着してないような状況で偏ってないか確認して、偏っていればその時点で前後左右に揺らしながら均一にし直せばいいかもしれません。 また、こういう手技は現場にいてやってみせたりとかしないとお互い見落としているところに気がつかずなかなか解決しないこともあるようなので、ちょっと書くのを躊躇してしまいがちです。 今のラボのほかの人はどうしてますか?同じ環境でいる人のやり方の方がずっと解決方法に近いような気がしますので。

(無題) 削除/引用 No.4302-3 - 2015/07/31 (金) 10:22:47 - ポスドク１１１ 意地が悪い人だね

(無題) 削除/引用 No.4302-2 - 2015/07/30 (木) 07:54:48 - おお ヒント: 過去ログ

細胞を均一に撒くには 削除/引用 No.4302-1 - 2015/07/30 (木) 06:31:39 - ポスドク１１１ 細胞を剥がして撒き直していざトランスフェクションなり分化実験なりしようとするとwellの中心に細胞が多く、均一に撒かれていないことがあるかと思います。 大変初歩的でお恥ずかしい質問なのですが、細胞をplateに均一に撒くにはどうすれば良いのでしょうか？ 正直な所、細胞培養を習った当初、「均一に撒くには細胞を撒いたあと上下左右に何回か揺らすといい」などと教えられたのですが、私自身これまで何も気にせず、特別揺らしたりしなくても均一に細胞が撒けていたにもかかわらず、最近中心に細胞が密集していることに気づき、どうにかしたいのですが良いアドバイスありますでしょうか？ 均一に撒けないことに気づいたのはラボを移動してからですので、その環境差（試薬であったりplateの違い）によって起こるのかなと思っています。 具体的な細胞名をここに書くことはできませんが、一般的ながん細胞株を使用しています。 mediumもDMEMで特殊な培養条件ではないため、私が考えられる原因としては前のラボで使用していたplateが今のラボと違う（前corning、現在ザルスタット）、手技が悪いくらいしか考えられません。 現在行っている実験では12well plateを良く使用しますが、手動（ギルソンのpipette）でチップの先を壁に付けて加えています。 問題点がわかるかたいましたらご意見いただけると幸いです、よろしくお願いします

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