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微量植物サンプルからのDNA抽出方法 トピック削除
No.4325-TOPIC - 2015/08/07 (金) 22:37:07 - 初級抽出者
現在植物の葉からDNA抽出をおこなっているものです。
乾燥品で数mg程度しか手元にない希少なサンプルから
DNAを抽出したいと考えております。
いまは乳鉢と液体窒素をもちいた抽出を予備実験としておこなっておりますが
サンプルが数mg程度ですとDNAの回収率がいまいちのようで
DNA抽出液を電気泳動にかけてもバンドが検出できませんでした。
これは、乳鉢からの回収率がよくないためにDNAを
しっかりと回収できていないためだと考えております。
数mg程度のサンプルの場合、ビーズ粉砕法が適しているのだろうとは思いますが
いまのところその機材がありません。
ビーズ粉砕法以外で微量サンプルからうまくDNAを回収できる方法は
ございませんでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.4325-5 - 2015/08/09 (日) 05:37:53 - 名無し
下記の会社は特に植物からの核酸抽出用試薬が豊富で、
試料を送れば抽出プロトコルを検討し作成してくれました(無料)。
今もそのサービスがあるかは分かりませんが、相談すれば誠実に対応してくれる印象です。

http://rizo.co.jp/

(無題) 削除/引用
No.4325-4 - 2015/08/08 (土) 07:10:38 - 初級抽出者
おお様

アドバイスありがとうございます。
抽出キットを色々ためしてみます。

(無題) 削除/引用
No.4325-3 - 2015/08/08 (土) 01:08:38 - おお
DNA抽出用キットがないか探してみてはどうでしょうか?

グラスビーズなどがあればそれをいれてボルテックスでもある程度破砕効果はありますが、ちょっと弱いかもしれませんね。

http://www.cosmobio.co.jp/product/detail/000005.asp?entry_id=526
こういうのもあるけど、これ単独か、そこにグラスビーズをいれてこれを使ってごりごりするとボルテックスより効果があるかもしれません。

ガラスは場合によってはDNAを吸着するので要注意ですけど。

http://www.funakoshi.co.jp/contents/5606
こんなのもあるね。DNAとか高分子だからIIのたいぷがいいかな。

(無題) 削除/引用
No.4325-2 - 2015/08/07 (金) 23:18:30 - おお
今までやってきた経験から数ミリグラムで、どれくらいのDNA量が取れると、見積もれるのですか?
その見積もりで電気えいどうに流してシグナルが得られる量ですか?

植物に関してはよくわかりませんが、細胞壁などなるべく酵素などで消化するとか抽出方法を工夫できないでしょうか?

微量植物サンプルからのDNA抽出方法 削除/引用
No.4325-1 - 2015/08/07 (金) 22:37:07 - 初級抽出者
現在植物の葉からDNA抽出をおこなっているものです。
乾燥品で数mg程度しか手元にない希少なサンプルから
DNAを抽出したいと考えております。
いまは乳鉢と液体窒素をもちいた抽出を予備実験としておこなっておりますが
サンプルが数mg程度ですとDNAの回収率がいまいちのようで
DNA抽出液を電気泳動にかけてもバンドが検出できませんでした。
これは、乳鉢からの回収率がよくないためにDNAを
しっかりと回収できていないためだと考えております。
数mg程度のサンプルの場合、ビーズ粉砕法が適しているのだろうとは思いますが
いまのところその機材がありません。
ビーズ粉砕法以外で微量サンプルからうまくDNAを回収できる方法は
ございませんでしょうか?

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