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通常のろ紙上での蛋白の固定と染色
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No.4337-TOPIC - 2015/08/13 (木) 18:04:04 - KT
いつも参考にさせていただいております。
PVDFのように通常ウェスタンブロットなどで使用されるメンブランではなく、実験の都合上ろ紙に染み込ませた蛋白をそのままろ紙に固定、染色できないか考えております。
例えば、ゲルを固定、染色する場合はメタノールなど蛋白をゲルに固定させて行いますが、同じようなことを蛋白が染み込んだろ紙(乾燥させてから使用)で行うイメージです。ただし、ろ紙に蛋白を染み込ませ、乾燥させてもメタノールなどに浸すと蛋白が漏れるのではないかと。
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No.4337-6 - 2015/08/14 (金) 11:41:33 - KT
みなさま、早速にどうもありがとうございます。
いただきましたアドバイスを基に一度予備検討をしてみたいと思います。
(無題)
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No.4337-5 - 2015/08/14 (金) 10:37:09 - toto
濾紙にスポットした蛋白をそのまま、ある程度高温(普通の機器乾燥機くらいの温度)で完全に乾かせば、変性してセルロース繊維に絡まるので、そのあとで水に浸してもメタノールでもあまり融けてこないはずです。高温にする必要も無い場合が多いですが。気になるなら、スポット後乾かして、10%TCAにつけて10分ほど煮ると完全に固定されて融けてこなくなります。
(無題)
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No.4337-4 - 2015/08/14 (金) 08:52:00 - おお
ニトロセルロースはウエスタンで使うけど、考えていらっしゃる実験では使えないのでしょうか?
なまえからわかると思いますが紙が原料ですので、、、
(無題)
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No.4337-3 - 2015/08/13 (木) 23:37:54 - おお
できるかどうか保証はないけど、PFAなどで固定とか、、、
(無題)
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No.4337-2 - 2015/08/13 (木) 18:25:19 - AP
ニンヒドリンで染めるのは?
スプレーすれば染められる(スプレー缶入りのも売ってたりする)ので、タンパク質のにじみは起こらない。CSIでもつかってたよ。
非破壊的染色でないとだめな実験かな?
通常のろ紙上での蛋白の固定と染色
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No.4337-1 - 2015/08/13 (木) 18:04:04 - KT
いつも参考にさせていただいております。
PVDFのように通常ウェスタンブロットなどで使用されるメンブランではなく、実験の都合上ろ紙に染み込ませた蛋白をそのままろ紙に固定、染色できないか考えております。
例えば、ゲルを固定、染色する場合はメタノールなど蛋白をゲルに固定させて行いますが、同じようなことを蛋白が染み込んだろ紙(乾燥させてから使用)で行うイメージです。ただし、ろ紙に蛋白を染み込ませ、乾燥させてもメタノールなどに浸すと蛋白が漏れるのではないかと。
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