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免染時のDapi染色後には水で洗うべきですか? トピック削除
No.4425-TOPIC - 2015/09/17 (木) 09:03:26 - 細胞免染
同僚から指摘を受けてしまったのでみなさんのご意見をお聞かせ頂ければと思います。

ガラスプレートに播種した培養細胞を免疫染色する際の質問です。
ラストにDAPIで最後の数分を染めます。その後、DAPIを吸引除去してマウントしているのですが、同僚から水で洗うべきと言われてしまいました。

DAPIはインターカレーターなので、核酸に結合しない限りは励起光ではされないと理解していました。ですからこれまでにDAPI後にわざわざ洗ったこともありませんし、マウンティングリージェントにDAPIが入っているものすらあると思います。

もちろん水で洗うメリットが他にあるのかもしれませんが、余剰なDAPIが染色に悪影響することはないと理解しています。みなさまはどうでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.4425-3 - 2015/09/17 (木) 09:46:41 - おお
単なる水ですか、、、でもそもそも洗う必要はないです。ただし、ほかのチャンネルで非常に感度を高くしないといけないとかそう言うのがあるなら、洗った方がいいこともあるかもしれません。洗うとしてもPBSとか個人的にはすると思いますけど。2次抗体に混ぜていて、抗体のwashとともに余分なものを流す人はいるんじゃなかったかな。

(無題) 削除/引用
No.4425-2 - 2015/09/17 (木) 09:45:48 - 独り言
むしろマウント液にDAPIが入っているので、入れたままというか、洗えません。DAPI入ったまま観察してます。

免染時のDapi染色後には水で洗うべきですか? 削除/引用
No.4425-1 - 2015/09/17 (木) 09:03:26 - 細胞免染
同僚から指摘を受けてしまったのでみなさんのご意見をお聞かせ頂ければと思います。

ガラスプレートに播種した培養細胞を免疫染色する際の質問です。
ラストにDAPIで最後の数分を染めます。その後、DAPIを吸引除去してマウントしているのですが、同僚から水で洗うべきと言われてしまいました。

DAPIはインターカレーターなので、核酸に結合しない限りは励起光ではされないと理解していました。ですからこれまでにDAPI後にわざわざ洗ったこともありませんし、マウンティングリージェントにDAPIが入っているものすらあると思います。

もちろん水で洗うメリットが他にあるのかもしれませんが、余剰なDAPIが染色に悪影響することはないと理解しています。みなさまはどうでしょうか?

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