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金がないので出来るだけ安く仕上げてます． 削除/引用 No.4603-4 - 2015/11/25 (水) 21:57:42 - Tany In-Fusionはよく使います． 私の場合は制限酵素処理したベクターの完全消化を電気泳動で確認後，ゲル抽出なしに使用しています (フェノクロ抽出，エタ沈はします)． このやり方でも問題なく当たりのクローンを取れますし，切れ残りのバックグラウンドも思ったより出ないなという印象です． また，私の場合はクローニングエンハンサーは用いておりません． 確かPCR産物をそのままIn-Fusionに持ち込むときに用いるときに加えるものだったと思いますが，ベクターもPCR産物もフェノクロ抽出とエタ沈で精製すれば問題なくクローニングできます． 効率の良しあしは別として，とにかくベクターに入ればよいのであれば，あまり質問の内容は気にしなくてもよいかと思います．

(無題) 削除/引用 No.4603-3 - 2015/11/21 (土) 16:30:51 - toto 良く使ってましたが、１は全く問題ないですというか、何か問題ですか？もちろん、切れ残りがないようにゲル抽出をしたほうが良いです。 2つめは、ゲル抽出です。ルーチン作業のPCR産物をつなぐのなら、クローニングエンハンサーを使うと簡単かもしれないですが。ただでさえInFusionは、GibsonAssemblyに比べるとエラーが割とでやすい印象があるので、あまり気持ちよくないです。エンハンサーを使ったときとそうでないときの比較はしたことは無いですが。

(無題) 削除/引用 No.4603-2 - 2015/11/21 (土) 15:53:01 - うーん In-fusionは使用してませんが、同じ原理のものはつかっているので。 １つ目の質問については、自分自身はやったことはないですが、原理上は可能。 マニュアルで２箇所切断するとなってるのは、単に通常法でのクローニング サイトを使いたいからでしょう。 ２つ目の質問については、両者で効率の差がどの程度あるかは、具体的には タカラに問い合わせてデータをもらうしかないのでは？ クローニングエンハンサーは、酵素処理でプライマーとテンプレートを 除いているだけと思われるので、ゲル注のほうが理想的ではあろうと思います。 ところで、土日にやりたいのかと思いレスしますが、基本的にはメーカーの テクニカルに問い合わせるべきことかと思います。

In-Fusionについて 削除/引用 No.4603-1 - 2015/11/21 (土) 15:21:32 - a 制限酵素で一か所切断したベクターにインサートをIn-Fusion を使用して挿入することは可能なのでしょうか． また，In-Fusion する前に，ベクターとインサートは電気泳動→ゲル抽出したもの，もしくは，クローニングエンハンサー処理をしたものどちらが良いのでしょうか． 初歩的質問で申し訳ありません． よろしくお願いします．

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