Bio Technical フォーラム

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SDS-PAGEでネガティブコントロールを流したのですが、、 トピック削除
No.4606-TOPIC - 2015/11/24 (火) 21:05:32 - KC
組み換え大腸菌を使って、膜タンパク質の発現を行いました。
確認のため、形質転換を行っていない大腸菌で発現、精製とまったく同じ手順を行い、SDS-PAGEでネガティブコントロールとして流しました。
何もバンドが出ないと思ったのですが、1.2カ所バンドが出てしまいました。
大腸菌由来のもののようですが、形質転換した大腸菌の方には出ていないので、なぜバンドが出てしまったのか分かりません…。
何かご存知の方がいらっしゃいましたらコメントくださると助かります。
 
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No.4606-5 - 2015/11/30 (月) 21:16:56 - 1q2w3え4r5t67890
再現性よくおなじ現象がみられるならばなにか理由はあると思うし、それはそれで追求することも意義はあると思うけど、本来の目的がリコンビナント蛋白質の精製ならば、とりあえず精製できてそうならば先に進んだ方がいいような気もします。

(無題) 削除/引用
No.4606-4 - 2015/11/25 (水) 08:11:32 - おお
たていすさんに一票

(無題) 削除/引用
No.4606-3 - 2015/11/25 (水) 07:15:21 - ykt
免疫染色なのか蛋白染色なのか。
精製はどうやって行ったか。
等を書いたほうが良いのではないでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.4606-2 - 2015/11/24 (火) 22:27:06 - たていす
>大腸菌由来のもののようですが、形質転換した大腸菌の方には出てい
>ないので、なぜバンドが出てしまったのか分かりません…。

カラムのキャパシティーが発現したタンパク質で飽和したとか、内在性のタンパクと発現させたタンパクで吸着強度が違うなどの説明ができるかもしれません。
分からなければ、妄想してみなさいね。自分の妄想(仮説)を問うほうが、建設的ではないかと思います。

SDS-PAGEでネガティブコントロールを流したのですが、、 削除/引用
No.4606-1 - 2015/11/24 (火) 21:05:32 - KC
組み換え大腸菌を使って、膜タンパク質の発現を行いました。
確認のため、形質転換を行っていない大腸菌で発現、精製とまったく同じ手順を行い、SDS-PAGEでネガティブコントロールとして流しました。
何もバンドが出ないと思ったのですが、1.2カ所バンドが出てしまいました。
大腸菌由来のもののようですが、形質転換した大腸菌の方には出ていないので、なぜバンドが出てしまったのか分かりません…。
何かご存知の方がいらっしゃいましたらコメントくださると助かります。

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