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(無題) 削除/引用 No.4613-4 - 2015/11/27 (金) 13:21:23 - おお そのTolCポンプが大腸菌で働いているならpromisingとまでいえませんが、ありがちなプロトコールかと思います。monさんが指摘するように変異原性のあるもので処理しながらselectionするほうほうを私も思いつきました。あるいは変異が起こりやすい大腸菌株もたしかあったと思いますので、そういうのでもいいかもしれません。 もし大腸菌のゲノムの変異などによる形質転換を考えている場合と、pSB1C3のTolCポンプの変異などによる活性の増強を考えているかでちょっとアプローチを変えたほうがいいかもしれません。ようするにpSB1C3のTolCポンプに変異があるものをつくって大腸菌に入れるか、大腸菌ごと変異原性の薬剤で処理するか。前者であれば フィデリティーを落とした PCRなどで変異を導入してスクリーニングするなどの方法も取れると思います。

(無題) 削除/引用 No.4613-3 - 2015/11/27 (金) 10:08:31 - mon pSB1C3のコピー数がどれくらいか知りませんが、変異原処理した方が早いかも？ また、大腸菌内の一つ（〜少数）に有用変異がある場合も想定出来ますので、変異plasmidのみに置き換えるために、plasmid抽出＞薄めて再度導入＞クローンをcheckというステップが必要でしょうね。

(無題) 削除/引用 No.4613-2 - 2015/11/27 (金) 08:18:39 - 小言幸兵衛 イケるのではないでしょうか。致死濃度より低い濃度でもそれに応じた生育低下が見られるなら、世代数を稼げるように低めの濃度で始めた方が良いようには思います。

大腸菌の適応的突然変異を誘発する方法 削除/引用 No.4613-1 - 2015/11/27 (金) 05:20:17 - もんちっち テルペン系化合物（我々の場合、主にゲラニオール）を膜外へ排出するTolCポンプをpSB1C3上で過剰発現している大腸菌(JM109)があります。 この大腸菌の排出能力を更に向上させたいと考えた時、一つの方法を考えました。 その方法は、上記の過剰発現体の致死量ギリギリのゲラニオールを含んだ培地中で多世代培養させ、適応的突然変異体を得ようとする、というものです。 まだ、研究というものをしたこがなく生命科学の初心者です。 この方法が、実現できそうなのか？また、この方法が失敗するであろう原因をお聞かせください。 どうか、よろしくお願いいたします。 乱文、失礼いたしました。

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