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培養細胞でのノンコーディングRNAの染色について トピック削除
No.4956-TOPIC - 2016/03/30 (水) 09:42:25 - コーディングされたい
ノンコーディングRNA (IncRNA)に注目してます。
培養細胞で、IncRNAの発現を可視化させて観察したいのですが、
経験が全くありません。
どのようにすればよいのでしょうか?
In situみたいにプローブを作ればいいのでしょうか・・・
in situもやったことがないのですが、どのような手法がよいのでしょうか?
プローブを作るのも難しいのでしょうか?
 
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No.4956-9 - 2016/03/30 (水) 18:28:20 - コーディングされたい
Brain situeも見てみます!
とても助かりました m(--)m

(無題) 削除/引用
No.4956-8 - 2016/03/30 (水) 17:26:39 - si
お役に立ててよかったです。

ちなみに、基礎生物学研究所のBrain situeのプロトコルも少しだけ参考にしました。

(無題) 削除/引用
No.4956-7 - 2016/03/30 (水) 15:51:17 - コーディングされたい
中川先生のブログや実験医学の記述を拝見しました。
とても分かりやすくて、初心者でも理解しやすい内容でした。
とりあえず、これらを参考にして実験を進めてみようかと思います。
si様、ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.4956-6 - 2016/03/30 (水) 14:11:08 - si
「ノンコーディングRNA ネオタクソノミ」のホームページで中川先生がノンコーディングRNAのin situを丁寧に解説してくださってます。

ブログのほうにも、in situのプロトコルなどの情報が丁寧に載っているので一度、拝見されることをおすすめします。

また、実験医学2015,9月号だったかな?のクローズアップ実験法にも同様のプロトコルが載っています。

私は、これらをかなり参考にしました。

どうでしょうか??

(無題) 削除/引用
No.4956-5 - 2016/03/30 (水) 13:55:26 - AP
ISHはRocheのDIG systemを使うのがグローバルスタンダードといってもよく、
無料で提供されていているマニュアル、Tips、実験例なども充実しています。
下手な実験書を読むよか良いです。

いつの間にかマニュアル第4版になってますね、
https://www.lifescience.roche.com/wcsstore/RASCatalogAssetStore/Articles/05353122001_08.08.pdf

その他の資料
https://www.lifescience.roche.com/shop/SearchDisplay?nameParam=&resultCatEntryType=1&pageView=detailed&catalogId=10001&beginIndex=0&showResultsPage=true&categoryId=&langId=-1&storeId=14501&sType=SimpleSearch&pageSize=5000&facet=ads_f10501_ntk_cs%3aDocuments&metaData=&searchTerm=dig+situ

(無題) 削除/引用
No.4956-3 - 2016/03/30 (水) 13:25:28 - コーディングされたい
おお様、ありがとうございます。
in situのプロトコールを勉強した方がよさそうですね・・・
探してみます。

(無題) 削除/引用
No.4956-2 - 2016/03/30 (水) 10:39:15 - おお
M2 RNA phage のコート蛋白に認識されるステムループをノックインとかして、M2 coat protein-EGFPなどの融合たんぱく質を発現させるとか言う方法はあるかもしれない。

in situはひとつの方法論です。多数のステップがありそれぞれにコツのようなものがあると思いますので、できればしっかり書かれたプロトコールを読まれることをお勧めします。

培養細胞でのノンコーディングRNAの染色について 削除/引用
No.4956-1 - 2016/03/30 (水) 09:42:25 - コーディングされたい
ノンコーディングRNA (IncRNA)に注目してます。
培養細胞で、IncRNAの発現を可視化させて観察したいのですが、
経験が全くありません。
どのようにすればよいのでしょうか?
In situみたいにプローブを作ればいいのでしょうか・・・
in situもやったことがないのですが、どのような手法がよいのでしょうか?
プローブを作るのも難しいのでしょうか?

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