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小腸からの粗酵素液調製方法 トピック削除
No.5024-TOPIC - 2016/04/27 (水) 13:25:05 - 実験初心者
はじめまして、実験初心者と申します。
粗酵素の調製方法について質問させていただきます。

現在シグマのラットの小腸パウダーから粗酵素液を調製しているのですが、
超音波破砕した懸濁液を遠心分離にかけたあと、どうしても
水面に浮遊物(細胞片)が出ています。
遠心分離の条件は、10mLの溶液を15,000g、15分、4℃です。
上清を回収する際にいつも浮遊物が邪魔になってしまい、
たまに吸い込んでしまったりします。
これは遠心の条件が悪いのでしょうか?
それとも何か別の部分で不手際があるのでしょうか?
ご教示をお願いします。
 
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(無題) 解決済み 削除/引用
No.5024-5 - 2016/04/27 (水) 15:01:56 - 実験初心者
> 似たような調整で、静電気を帯びやすいプラスチック:研究室よくあるチップ、遠心するチューブもうまくすると壁面にひっつく、あれば棒なんかでもいいかも:で浮遊物をつけて除去しています。私が行っているものは、浮遊しているものは遠心をもっとかけても落ちてこなかったです。

ピペットで上清を回収する際にチップに細胞片がくっついてしまって困っていたのですが、逆に考えればその方法で除去もできそうですね。ありがとうございます!

(無題) 削除/引用
No.5024-4 - 2016/04/27 (水) 14:59:37 - 実験初心者

> メッシュなどでこすとかする場合もあるんじゃないかなぁ。

濾すなどの工程が手持ちのプロトコールに記載されていなかったので思いつきませんでした、やってみます!

チップなど 削除/引用
No.5024-3 - 2016/04/27 (水) 14:21:25 - ema
似たような調整で、静電気を帯びやすいプラスチック:研究室よくあるチップ、遠心するチューブもうまくすると壁面にひっつく、あれば棒なんかでもいいかも:で浮遊物をつけて除去しています。私が行っているものは、浮遊しているものは遠心をもっとかけても落ちてこなかったです。

(無題) 削除/引用
No.5024-2 - 2016/04/27 (水) 13:36:48 - おお
メッシュなどでこすとかする場合もあるんじゃないかなぁ。

小腸からの粗酵素液調製方法 削除/引用
No.5024-1 - 2016/04/27 (水) 13:25:05 - 実験初心者
はじめまして、実験初心者と申します。
粗酵素の調製方法について質問させていただきます。

現在シグマのラットの小腸パウダーから粗酵素液を調製しているのですが、
超音波破砕した懸濁液を遠心分離にかけたあと、どうしても
水面に浮遊物(細胞片)が出ています。
遠心分離の条件は、10mLの溶液を15,000g、15分、4℃です。
上清を回収する際にいつも浮遊物が邪魔になってしまい、
たまに吸い込んでしまったりします。
これは遠心の条件が悪いのでしょうか?
それとも何か別の部分で不手際があるのでしょうか?
ご教示をお願いします。

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