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溶菌ファージの一遺伝子欠失の実験法方 トピック削除
No.5044-TOPIC - 2016/05/06 (金) 22:59:46 - unicorn
みなさんこんにちは

私は今、溶菌ファージの遺伝子を欠失させようと考えておりますが、図書館やネット、論文などを調べましたが、溶菌ファージのノックアウトの作製方法が具体的に記載されている資料がありませんでした。どのたか、ファージの遺伝子欠失に関する本や論文等、もしくは手法が明る方いらっしゃいましたらご教授のほどよろしくお願い致します。
　
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No.5044-10 - 2016/05/09 (月) 21:48:04 - unicorn
皆様、色々と調べたところ、insertion/substitution vector systemというものを利用することにしました。

どうもありがとうございました。

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No.5044-9 - 2016/05/09 (月) 07:43:13 - 小言幸兵衛
Ｔ系といってもいろいろなので、名前を書いた方が話が早いと思う。

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No.5044-8 - 2016/05/09 (月) 02:53:20 - おお
T7などはファージディスプレーなどで使われていて、ファージをモディファイできるので、それを参考にマニピュレーションすればいいのかと。ゲノムをIn vitroでパッケージングできるので、ゲノムテンプレートがあればPCRなどを使って変異が入ったフラグメントを作って、その部分を制限酵素などで切り貼りして、パッケージングすることはできると思います。ただ、変異により増えないとだとどうかなという感じはしますけど、、、

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No.5044-7 - 2016/05/09 (月) 01:07:52 - unicorn
>[Re:4] monさんは書きました :
> ファージのpackaging extract等が販売or自作できて（=感染能力があるファージ粒子が作製できて）、かつファージゲノム全長の遺伝子配列が公開されているなら、PCRで変異導入が簡便かな。。
packaging extractはファージ粒子ですか。PCRで作成した変異をファージ粒子内に入れられますでしょうか。また、PCRでもKO株は作成できますでしょうか。


> あるいは、溶原化している（微生物のゲノムに挿入されている）遺伝子のKOですか？
> これなら、微生物ゲノム上の遺伝子KOと同様に出来ますよ。
T系ファージ（溶菌ファージ）を用いようと思っています。

(無題) 削除/引用
No.5044-5 - 2016/05/09 (月) 00:39:55 - unicorn
>[Re:2] おおさんは書きました :
> どのファージかわかりませんけど、ファージでライブラリーつくったりしますから、そういう意味ではマニピュレーションする方法が確立されたファージはありますけど。。。


ありがとうございます。今、T系のファージを用いて欠失株を作ろうとしています。ファージでライブラリーというのは欠失株のライブラリーということでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.5044-4 - 2016/05/08 (日) 09:12:16 - mon
ファージのpackaging extract等が販売or自作できて（=感染能力があるファージ粒子が作製できて）、かつファージゲノム全長の遺伝子配列が公開されているなら、PCRで変異導入が簡便かな。。

あるいは、溶原化している（微生物のゲノムに挿入されている）遺伝子のKOですか？
これなら、微生物ゲノム上の遺伝子KOと同様に出来ますよ。

(無題) 削除/引用
No.5044-2 - 2016/05/06 (金) 23:22:32 - おお
どのファージかわかりませんけど、ファージでライブラリーつくったりしますから、そういう意味ではマニピュレーションする方法が確立されたファージはありますけど。。。

溶菌ファージの一遺伝子欠失の実験法方 削除/引用
No.5044-1 - 2016/05/06 (金) 22:59:46 - unicorn
みなさんこんにちは

私は今、溶菌ファージの遺伝子を欠失させようと考えておりますが、図書館やネット、論文などを調べましたが、溶菌ファージのノックアウトの作製方法が具体的に記載されている資料がありませんでした。どのたか、ファージの遺伝子欠失に関する本や論文等、もしくは手法が明る方いらっしゃいましたらご教授のほどよろしくお願い致します。
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