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1年間凍結保存した脳切片の染色 トピック削除
No.5051-TOPIC - 2016/05/09 (月) 20:41:15 - スス
現在リバイス実験中の者ですが、少し困った状態のため投稿させて頂きました。

これまでに還流固定後にOCT包埋した脳ブロックから薄切、浮遊染色法による免疫染色を実施してきました。抗体のワーク、染色方法共にルーチンでやっているので、特に新しいテクニックにトライしたわけではございません。

今回、リバイスで要求された実験に取り組むため、1年近くOCT包埋後に保存(-30℃)していた脳ブロックを薄切、染色したところ、シグナルがかなり悪く、場合によっては染まらないといった状況です。

あまりこのような状態に遭遇したことがないのですが、抗原の賦活化等の操作で染色像が回復するものでしょうか?また、原因や対策等具体的なものがあればアドバイスをお願いします。

ちなみに、薄切作業まではスムースにいっていたので、外見上はいつもと変わりません。染色像は全体的にバックが高い気がします。
 
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(無題) 削除/引用
No.5051-4 - 2016/05/10 (火) 06:59:16 - あ
材料のとりなおし以外、科学的には正しくないのでは

(無題) 削除/引用
No.5051-3 - 2016/05/09 (月) 23:18:13 - スス
ano様>

仰る通り、保存温度の重要性を身を以て体験させて頂きました。
このような状況では、何か対応する手段はあるのでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.5051-2 - 2016/05/09 (月) 22:46:04 - ano
切るときにマイナス30度にするのはかまいませんが、長期保存にはマイナス80度でしょう。

複数小分けしておいて、必要分だけ取り出して、使わないもの以外はマイナス80度保存、というのは、常識だと思いますが。

1年間凍結保存した脳切片の染色 削除/引用
No.5051-1 - 2016/05/09 (月) 20:41:15 - スス
現在リバイス実験中の者ですが、少し困った状態のため投稿させて頂きました。

これまでに還流固定後にOCT包埋した脳ブロックから薄切、浮遊染色法による免疫染色を実施してきました。抗体のワーク、染色方法共にルーチンでやっているので、特に新しいテクニックにトライしたわけではございません。

今回、リバイスで要求された実験に取り組むため、1年近くOCT包埋後に保存(-30℃)していた脳ブロックを薄切、染色したところ、シグナルがかなり悪く、場合によっては染まらないといった状況です。

あまりこのような状態に遭遇したことがないのですが、抗原の賦活化等の操作で染色像が回復するものでしょうか?また、原因や対策等具体的なものがあればアドバイスをお願いします。

ちなみに、薄切作業まではスムースにいっていたので、外見上はいつもと変わりません。染色像は全体的にバックが高い気がします。

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