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OKT3を用いたT細胞除去 トピック削除
No.5060-TOPIC - 2016/05/13 (金) 20:25:04 - 名前
ヒトPBMC由来NK細胞の培養をしています。培養2週間でNK頻度を80%以上にしたいのですが、実際の頻度は20〜30%前後で、殆どがCD3陽性細胞でした。精製したNK細胞を使用すれば、この問題は解消すると思いますが都合により使用できません。
また以前に、1 μg/mL OKT3を培養液中に添加して、T細胞の除去を試みましたが結果は変わりませんでした。OKT3によるT細胞除去についてご見識がある方がいれば何かアドバイスを頂けないでしょうか。NK細胞の培養はリツキサン固相化プレートにPBMCを播種し、RPMI培地に10% human AB serum + 700 IU/mL IL-2を添加して培養しています。
 
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No.5060-5 - 2016/05/14 (土) 01:37:51 - 名前
> それかOKT3をイモビライズドして、パンニングでT細胞除くとか。確かT細胞じゃないけど、他の血球系の細胞でやった記憶がありまして。

ありがとうございます。
その方法は試したことないです。T細胞をトラップして浮遊画分のみを培養するという理解で宜しいでしょうか。どのくらいフラスコ接着するNK細胞がいるのかが気になりますが、それも含めて検討してみたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.5060-4 - 2016/05/14 (土) 00:06:48 - うんちょこちょこぴー
失礼しました。。

OKT3を加えた後にウサギの血清を補体源として加えてCDCで殺すとかどうだろう。
それかOKT3をイモビライズドして、パンニングでT細胞除くとか。確かT細胞じゃないけど、他の血球系の細胞でやった記憶がありまして。

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No.5060-3 - 2016/05/13 (金) 23:22:11 - 名前
> うんちょこちょこぴーさんは書きました
> OKT3はsolubleですか?それもimmobilizedする必要だった気がするようなしないよ
うな。

回答ありがとうございます。培養液中に添加しただけなのでmobilizedです。ImmobilizedではCD3陽性細胞が増えてくるので。

(無題) 削除/引用
No.5060-2 - 2016/05/13 (金) 21:43:52 - うんちょこちょこぴー
OKT3はsolubleですか?それもimmobilizedする必要だった気がするようなしないような。

OKT3を用いたT細胞除去 削除/引用
No.5060-1 - 2016/05/13 (金) 20:25:04 - 名前
ヒトPBMC由来NK細胞の培養をしています。培養2週間でNK頻度を80%以上にしたいのですが、実際の頻度は20〜30%前後で、殆どがCD3陽性細胞でした。精製したNK細胞を使用すれば、この問題は解消すると思いますが都合により使用できません。
また以前に、1 μg/mL OKT3を培養液中に添加して、T細胞の除去を試みましたが結果は変わりませんでした。OKT3によるT細胞除去についてご見識がある方がいれば何かアドバイスを頂けないでしょうか。NK細胞の培養はリツキサン固相化プレートにPBMCを播種し、RPMI培地に10% human AB serum + 700 IU/mL IL-2を添加して培養しています。

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