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ジェノタイピングの頻度について 削除/引用 No.5136-7 - 2016/06/07 (火) 17:54:51 - 研究ビギナー ありがとうございます. 大変参考になりました. 脱水から検討してみます. 私も同じように冷やしながら,やってみます. 大変ご親切にありがとうございました.

(無題) 削除/引用 No.5136-6 - 2016/06/07 (火) 17:07:21 - 鹿 脳でしたか、それでしたら脱水･脱脂･パラフィン浸透の工程に不十分な可能性が大きいです 過去の質問に同じ質問がありますので参考にしてみてください http://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech/biotechforum.cgi?mode=view;Code=4148 経験上なのですがパラフィンが古かったりすると薄切しにくいことがあります。 冷やしながら薄切するときはカセットはミクロトームに置いたままで冷やしてます。 一々付け替えてしまったら位置が微妙にずれてしまうので… 別の研究室の方では試料にキムタオルを載せ、その上に保冷材を載せて冷やしたりしていましたよ。

ミクロトームでのパラフィン切片作製について 削除/引用 No.5136-5 - 2016/06/07 (火) 16:54:39 - 研究ビギナー ご回答ありがとうございます. はい,すべて手作業で行っています. また,マウスの脳を切片化しています. その方法ですと,3~5枚おきに冷やすためにサンプルをミクロトームから外しているということでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.5136-3 - 2016/06/07 (火) 12:13:47 - 鹿 こんにちは、はじめましてレス失礼します。 どんな組織を切ってるのか分からないのですし、ひび割れにもいろいろな原因があります。 ●硬組織系の場合は脱灰不十分。 ●他の組織の場合脱水･脱脂の工程が不十分。 ●組織が大きすぎる。(＝パラフィンが浸透不十分) あまり詳しくかかれていないのですが、脱水･脱脂の工程は手作業で行ってますか？ 参考にならないかもですが、普段私は硬組織を切っていて脱灰からカセットを冷蔵庫に入れています。 そのため、薄切するときも試料を冷やしながら薄切しています。 冷やし方は水に濡らしたキムワイプを軽く絞って氷上に何個か作って、キンキンに冷えてるものを試料の上に置き、試料が冷えたら一気に3〜5枚切って→冷やして→切っての繰り返しでやっています。

ミクロトームでのパラフィン切片作製について 削除/引用 No.5136-1 - 2016/06/07 (火) 00:03:25 - 研究ビギナー C57BL/6マウスを4%PBSとPFAで灌流固定,エタノールで脱水し,キシレンで透徹,パラフィンに包埋後,回転式ミクロトームを用いて厚さ8μmの切片を作製しています. しかし,切っているとヒビが入ってしまいうまく切れません. ミクロトームの刃を交換しても状況が変わりません. サンプルを室温に戻してから切ったほうが良い,逆に冷たいほうが良いなど書かれているものを見かけたので,試してみましたが,やはりうまくいきません. 何が原因でヒビが入ってしまうのかわかりません. 皆さんはどのようにされていますか？ よろしければご教授ください.

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