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C2C12細胞 分化誘導について トピック削除
No.5160-TOPIC - 2016/06/15 (水) 16:49:18 - nasso
現在、24ウェルプレートにC2C12を撒き、以下の通り分化誘導をしています。

@細胞を撒く(1×10の4乗個/1well)
A翌日分化を開始。2%Horse Serum/DMEM(HG)
B2日に一回m/c
C5日間で分化終了。解析へ

しかし分化を開始してからというもの、ウェルから細胞が剥がれ、一部凝集する現象がみられ困っています。(肉眼でも凝集が確認できるほどです)

分化誘導を行う前段階ではこのような現象は見られません。
凝集や細胞の剥がれは日に日に増加していく印象です。
プレートは解析用の少し特殊なプレートで、底面積がやや狭いタイプのものです。

原因がわからなくて困っています。
どうか知恵をお貸ください。
 
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(無題) 削除/引用
No.5160-6 - 2016/06/16 (木) 12:01:25 - nasso
皆様、回答いただきありがとうございます。

細胞培養プレートは、Seahorse社の細胞外フラックスアナライザー専用のプレートを使用しています。
このプレートだと1wellの底面直径がおよそ6mm程度で(通常の24wellプレートの1/4程度の底面積)、この細胞数でも100%コンフルに近い状態になります。

通常の24wellプレートで同じように分化誘導をさせたことはありません。

プレートと細胞の接着の問題、検討してみます。
ありがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.5160-5 - 2016/06/16 (木) 06:54:25 - ecm
特殊なプレートということですが、表面処理の問題はありませんか?
ECMなどのタンパク質の吸着が弱い表面だと、細胞が接着できなくて剥がれたり凝集する原因になります
普通の24-wellで問題なく分化誘導できるのでしょうか

(無題) 削除/引用
No.5160-4 - 2016/06/16 (木) 00:36:27 - おお
私も少ないのかなぁと思いました。

(無題) 削除/引用
No.5160-3 - 2016/06/15 (水) 17:39:25 - まっくろん
 すいません「少ないのでは」の誤りです。

(無題) 削除/引用
No.5160-2 - 2016/06/15 (水) 17:38:22 - まっくろん
 24 wellで1×10^4個で翌日分化は細胞数が少なくないのではないでしょうか。こちら細胞をまいて,顕微鏡下で80%以上コンフルっていう感じで実験しており,先行報告でもそのようなものをよく見ます。

C2C12細胞 分化誘導について 削除/引用
No.5160-1 - 2016/06/15 (水) 16:49:18 - nasso
現在、24ウェルプレートにC2C12を撒き、以下の通り分化誘導をしています。

@細胞を撒く(1×10の4乗個/1well)
A翌日分化を開始。2%Horse Serum/DMEM(HG)
B2日に一回m/c
C5日間で分化終了。解析へ

しかし分化を開始してからというもの、ウェルから細胞が剥がれ、一部凝集する現象がみられ困っています。(肉眼でも凝集が確認できるほどです)

分化誘導を行う前段階ではこのような現象は見られません。
凝集や細胞の剥がれは日に日に増加していく印象です。
プレートは解析用の少し特殊なプレートで、底面積がやや狭いタイプのものです。

原因がわからなくて困っています。
どうか知恵をお貸ください。

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