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(無題) 削除/引用 No.5177-3 - 2016/06/23 (木) 20:48:36 - タネラー ご回答ありがとうございます。 TUNELで全く染まらないのは別かもしれませんが、確かに、アポトーシスが進みすぎて剥がれて浮いている細胞の可能性も否定できません。 早速、ガラスのコーティングをしてみたいと思います。ちなみに、私の勉強不足で恐縮ですが、Poly-L-Lysineがよく用いられるのでしょうか？ また、そのほかの原因について知っておられる方も、回答お待ちしております。

(無題) 削除/引用 No.5177-2 - 2016/06/23 (木) 09:16:25 - おお 多分これはお気づくと思うのですが、細胞死を起こした細胞は剥がれやすくなっています。培養している間、または染色操作の間に剥がれていっているかもしれません。Poly-L-Lysine などでコートした上に撒いたりしたらどうかなとちょっと思いました。

TUNEL陽性細胞の検出について 削除/引用 No.5177-1 - 2016/06/22 (水) 22:37:32 - タネラー 初めての投稿で失礼します。 現在、あるmiRNAによる癌細胞のアポトーシス抑制効果を調べるため、様々な悪性腫瘍由来細胞株（接着系）にmiRNA mimicをLipofectamine RNAiMAXを用いてtransient transfectionし、DeadEnd Fluorometric TUNEL Systemでアポトーシス細胞の検出を検討しています。 TUNELのポジコンとして、パーミライズ後にDNase処理したサンプルはしっかり陽性に染まります（promega推奨のポジコン作成法です）。しかし、アポトーシス誘導できるはずのactinomycin D添加サンプルや、目的のmiRNA添加サンプル、無血清でtransfectしたサンプルなどでは全く染まりません。 予備実験で、transfectionのタイムコース、mimicの濃度などは検討しており、参考文献等からも、DNase以外で全く染まらない（actinomycin Dも含め）のは何故だろうと頭を悩ませております。 過去の研究報告すべてを鵜呑みにはしておりませんが、DNaseのようなものでなく、actinomycin Dやanti-Fas Ab、無血清培地で培養などなど、いわゆるアポトーシスを起こさせても細胞がTUNELで染まらない原因が何かわかる方、同じような現象を解決できた方、お知恵をお貸しください。 よろしくお願いいたします。

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