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細胞を生きたまま免疫染色 トピック削除
No.5252-TOPIC - 2016/07/19 (火) 11:33:46 - ニンニン
細胞を生きたまま、抗体で免疫染色したいです。
これって可能でしょうか?
例えば、固定やぱーみあびらいずをせずに、細胞表面で発現している
タンパク質に対する抗体で蛍光観察することって可能ですか?
 
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局在をどこまでみるか 削除/引用
No.5252-5 - 2016/07/19 (火) 15:41:27 - ema
Flowcyteで表面抗原を染色してソートして再度培養という手技が一般的にあるので、染色までは十分可能です。(ソート前に確認で顕微鏡で見たこともあります)局在の場合は他の方が指摘されているように抗体を充てることにより膜のラフトが起こって変化する可能性は0ではありませんので、どこまでシリアスに局在を知りたいかによっては固定するしかないこともあります。

(無題) 削除/引用
No.5252-4 - 2016/07/19 (火) 13:57:28 - Kitty
できますね。
抗体がアゴニスティックに働くと内在化するかもしれません。
その場合は、4℃, NaN3処理しながら染色ですかね。

ジギトニンで生細胞に穴をあけて細胞内染色して、
セミインタクトとしている論文を読んだことがあります。

(無題) 削除/引用
No.5252-3 - 2016/07/19 (火) 12:02:27 - ニンニン
できるんですね!!
局在の問題を考慮してみたいです!!

(無題) 削除/引用
No.5252-2 - 2016/07/19 (火) 11:41:51 - 中年
もちろんできますが、抗体は2価なので本来の局在とは変わってしまうこともあり得ますよ。

細胞を生きたまま免疫染色 削除/引用
No.5252-1 - 2016/07/19 (火) 11:33:46 - ニンニン
細胞を生きたまま、抗体で免疫染色したいです。
これって可能でしょうか?
例えば、固定やぱーみあびらいずをせずに、細胞表面で発現している
タンパク質に対する抗体で蛍光観察することって可能ですか?

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