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生きたまま 削除/引用 No.5257-5 - 2016/07/20 (水) 19:31:49 - 774R 細胞表面に露出してるエピトープに限定して染色したい場合は、生きたまま1次抗体を反応させ、後にPFA固定すると良いと思います。 生きたまま2次抗体も反応させてしまうと凝集するリスクが非常に高いので、固定後に2次抗体を反応させます。

(無題) 削除/引用 No.5257-4 - 2016/07/20 (水) 10:28:19 - AP 抗体希釈液に界面活性剤が入っているならそれで十分ということもあります。

(無題) 削除/引用 No.5257-3 - 2016/07/20 (水) 10:27:01 - AP PFAでなくフォルマリンを使っている場合、 市販品は安定剤（重合防止剤）として最大10%くらいのメタノールを含んでいます（特別品としてメタノールフリーはある）。このメタノールで膜が傷害されてしまうことがあります。このために、ある種の膜タンパク質はフォルマリンから持ち込まれるメタノール溶出してしまって免疫染色ができなくなると言われています。

(無題) 削除/引用 No.5257-2 - 2016/07/20 (水) 01:40:41 - おお PFAで固定した時点で細胞膜はかなりダメージをうけてますのである程度抗体はアクセス可能かと。まあ細胞や蛋白によっては透過処理をしないとうまく染まらないのもあると聞きます。

細胞の免疫染色 削除/引用 No.5257-1 - 2016/07/19 (火) 23:49:47 - 教えて下さい。 さっき培養細胞を4%PFA固定してからパーミアライゼーション処理しないで免疫染色したら核とかがきれいに染まったんですが、そういう事ってあるのでしょうか。抗体がどこから細胞の中に入ったのかがわかりません。分かる人いたら教えて下さい。

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