Bio Technical フォーラム

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DTT処理での黄化 トピック削除
No.5294-TOPIC - 2016/08/01 (月) 16:14:02 - まもる
お世話になります。
BL21で発現した6xHisタグが付加されたチオレドキシンを精製しました。最終的に溶出するバッファーの組成は、20 mM Tris, pH8.0, 500 mMのNaCl, 0.5 MのImidazoleです。
本バッファーに含まれるチオレドキシンに終濃度20 mMでDTTを処理したところ、溶液が黄色になりました。不溶化するタンパク質もあり、遠心するとペレットが見られます。ただ、チオレドキシンは不溶化していないようなので、使用に問題はなさそうなのですが、溶液が黄色になる原因を知りたいと考えています。DTTは作りたての新しいものを使用しました。

もし何か情報がありましたらお教え頂けましたら幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.5294-6 - 2016/08/02 (火) 06:47:08 - おお
http://journals.iucr.org/f/issues/2014/01/00/no5032/no5032.pdf
これとか

(無題) 削除/引用
No.5294-5 - 2016/08/02 (火) 06:36:29 - おお
http://www.jbc.org/content/287/47/39686/F1.expansion.html

これとか

(無題) 削除/引用
No.5294-4 - 2016/08/01 (月) 21:17:06 - AP
イミダゾールを含むバッファーの黄変は珍しくない現象でHisタグ精製系には影響ないとされているようです。
https://www.applichem.com/en/shop/product-detail/as/imidazol-pufferqualitaet/

Googleでimmidazol yと入力したところでyellowが予測候補に出るくらい。
長期保存、加熱で促進されるが、immidazolの品質なんかにもよるらしい。

(無題) 削除/引用
No.5294-3 - 2016/08/01 (月) 19:03:05 - おお
http://www.dojindo.co.jp/letterj/128/review/01.html
フラビンの酸化還元状態が関係してるんじゃないかな。。。

Ni-NTA Agaroseの遠心 削除/引用
No.5294-2 - 2016/08/01 (月) 17:09:30 - m
pH

DTT処理での黄化 削除/引用
No.5294-1 - 2016/08/01 (月) 16:14:02 - まもる
お世話になります。
BL21で発現した6xHisタグが付加されたチオレドキシンを精製しました。最終的に溶出するバッファーの組成は、20 mM Tris, pH8.0, 500 mMのNaCl, 0.5 MのImidazoleです。
本バッファーに含まれるチオレドキシンに終濃度20 mMでDTTを処理したところ、溶液が黄色になりました。不溶化するタンパク質もあり、遠心するとペレットが見られます。ただ、チオレドキシンは不溶化していないようなので、使用に問題はなさそうなのですが、溶液が黄色になる原因を知りたいと考えています。DTTは作りたての新しいものを使用しました。

もし何か情報がありましたらお教え頂けましたら幸いです。

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