Bio Technical フォーラム

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細胞のクローニングに関して トピック削除
No.5300-TOPIC - 2016/08/03 (水) 21:55:56 - まゆみ
RAW264細胞を用いて、特定の薬剤を培地中に添加した際に特定の細胞へと必ず分化する(何に分化するのかは分かっています)といった細胞のクローンを他のラボから頂き、使用する予定です。色々調べ、限界希釈法などを見つけたのですが、RAW264を特定の薬剤で刺激したときに、特定の細胞へ分化するRAW264細胞のクローンを獲得するためには、やはり限界希釈法を用いるのでしょうか?
 
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No.5300-3 - 2016/08/04 (木) 07:02:06 - asan

クローンをもらったのか、自分でクローン化するのか良くわかりませんが、限界希釈可能ならそれでいいと思います。iPSへのリプログラムとかで良くやられるのはFACSソートしてそれぞれのクローンを追随するって方法ですね。でもRAW細胞がソーティングのダメージに耐えられるか、あるいはシングル化すると増えなくなる可能性もなきにしもあらずなので、その場合は限界希釈もそうですが、薄播きしてコロニーピックとかするしかないかもしれませんね。

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No.5300-2 - 2016/08/04 (木) 00:57:55 - おお
限界希釈法でなくてもいいですけど、分化する形質を利用できればそれでもいいですし。分化が不可逆な場合は何らかの形でクローンを取ってからスクリーニングすることになるでしょう。

細胞のクローニングに関して 削除/引用
No.5300-1 - 2016/08/03 (水) 21:55:56 - まゆみ
RAW264細胞を用いて、特定の薬剤を培地中に添加した際に特定の細胞へと必ず分化する(何に分化するのかは分かっています)といった細胞のクローンを他のラボから頂き、使用する予定です。色々調べ、限界希釈法などを見つけたのですが、RAW264を特定の薬剤で刺激したときに、特定の細胞へ分化するRAW264細胞のクローンを獲得するためには、やはり限界希釈法を用いるのでしょうか?

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