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(無題) 削除/引用 No.5309-5 - 2016/08/05 (金) 11:45:26 - RT みんな有り難うね！

(無題) 削除/引用 No.5309-4 - 2016/08/04 (木) 18:15:02 - AP 変性条件はどっちでも大差ない。 ただしランダムプライマーの場合、酵素反応の開始時、低温(室温)で5分ほどの置いてから、酵素の至適温度にする。ランダムプライマーは短いので、いきなり温度を上げると鋳型にアニールできずに伸長が開始できない。 定量PCRのときはランダムプライマーの方が、バイアスがかからないので好まれる(分解しやすさとかは関係なく)。

(無題) 削除/引用 No.5309-3 - 2016/08/04 (木) 16:54:52 - AP RNAの二次構造を解くための熱変性じゃ。 プライマーの種類の違いではなく、単なる流儀じゃ。

(無題) 削除/引用 No.5309-2 - 2016/08/04 (木) 16:31:10 - おお ６０何度とかってプライミングの温度なのか、、、 インビトロジェン（ライフテック）のスーパースクリプトのプロトコールみるとたしかランダムプライマーの場合は６０何度で処理して一度氷上で冷した後に室温で何分かおけって書いてたようなきがする。そのランダムプライマーの方法に合わせてもいいんじゃないかな。

mRNAからcDNA調整に必要なプライマーについて 削除/引用 No.5309-1 - 2016/08/04 (木) 16:05:07 - RT こんにちは。 mRNAからcDNAを調整する際のことについて教えて下さい。 これまで私はoligo dTプライマーを用いてきましたが、mRNAの分解が多い組織を対象にしているからなのか、上司からランダムプライマーの併用を勧められました。 調べたところ、oligo dTとmRNAとのプライミングの条件（65℃, 3 min）とランダムプライマーの条件は異なるという指南書もあれば、単純に両者を混ぜて65℃, 3 minのプライミングをしている本も見かけました。 皆様はoligo dTプライマーとランダムプライマーの併用はされたことありますか？ その際の条件を教えていただけると幸いです。 宜しくお願いします。

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