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HRPでラベルする方法は良いと思います 削除/引用 No.5409-6 - 2016/09/23 (金) 21:01:44 - びびび お答えいただいた方々、色々アイディアをいただきありがとうございます。 細胞を単離できれば良いのですが、目的の細胞が細胞外マトリックスで包まれており、そのマトリックスをラベルしたいという目的のため、難しそうで残念です。ＨＲＰでラベルする方法は良いかもしれません。ラベルした後、LS/MSに持っていき解析なので、多少タンパクが壊れても、断片が解析できれば、使い勝手が良さそうです。網羅的と言っても複数のタンパク質を同定したいという研究ですので、ある程度のfalse positiveがあっても仕方ないと思っています。 まずは、答えてくださった方にお礼まで。 もうすこしどなたかのお答えを待ちます。

(無題) 削除/引用 No.5409-5 - 2016/09/17 (土) 10:29:24 - mon 特定の細胞に表面マーカー抗体があるなら、その抗体にHRP（場合によってはpolymer-HPR)を付けて、ビオチンチラミンを基質として細胞表面タンパクをビオチン化する、とか。 polymer-HPRをつかう理由は、ビオチンチラミンで標識される範囲を広げる・標識量の増大のためです。 HRP標識二次抗体でも良いかも。

(無題) 削除/引用 No.5409-4 - 2016/09/17 (土) 07:32:38 - そも 素人の感想ですが解析対象が細胞なのか組織なのかで方法も変わりそうな気がします。 ただ、特定の細胞ならソーティング、組織レベルならコラゲナーゼなどでシングル・セルにした上でビオチンラベルすれば培養細胞と同じように解析できそうですよね。

ラベルした後網羅的 削除/引用 No.5409-3 - 2016/09/16 (金) 19:30:46 - びびび さきほど簡単に書いてしまいました。ラベルしたあと、組織を回収し、ラベルされたタンパク質を回収して網羅的な解析に用いたいと考えています。どうぞよろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.5409-2 - 2016/09/16 (金) 14:48:53 - サンショウウオ 凍結切片作って免疫染色とかでしょうか？

細胞外タンパク質のラベル 削除/引用 No.5409-1 - 2016/09/16 (金) 10:07:04 - びびび 生体内の中にある特定の細胞もしくは特定の領域にある細胞外タンパク質をラベルする方法をご存知の方がいましたら教えてください。 培養細胞の場合、ビオチンラベルなどが有用ですが、生体内の組織から細胞外のタンパク質だけを取る場合、分画抽出ぐらいしか思いつきません。 例えばトランスジェニックマウスで特定の細胞をラベルするような、長期の実験でも構いません。 お知恵を貸してください。

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