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ハエ4齢幼虫の超音波処理の方法 トピック削除
No.5463-TOPIC - 2016/10/10 (月) 09:51:28 - はえはえまん
いつも勉強させてもらってます。
ハエの4齢幼虫をライシスバッファーで可溶化させたいんですが、その時超音波処理を使おうと思ってます。この超音波の機械は専用の液体に、サンプルを入れたエッペンチューブを入れ、それをなぞの液体に浮かせて超音波処理するというもので、金属製のホーン的なものをサンプルチューブに差し込み超音波を当てるものとは違います。

ただあまりタンパク質が上清にこないのか、超音波処理が正しく行われてるか謎です。
1.5mlのエッペンチューブにサンプルを1mlも入れるのではキャパが大き過ぎてしまいますか?
これがもし細胞や大腸菌ならトリパンブルーや鏡顕下で調べられるのですが、ハエの場合、ホモジナイズの効果を調べるのは定まってません。。容量が多過ぎると超音波はかかりにくいですか?
 
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(無題) 削除/引用
No.5463-6 - 2016/10/12 (水) 17:54:52 - AP
手でペッスルを扱うのが大変だったら、ペッスル用の電動ドライブがある。
電動ドライバー、リューターなんかにペッスルを取り付けてもいいかもしれない。
私はポリトロンでやっちゃうのが好きだけど、多サンプルの場合、サンプルを変えるときにブレードを洗うのが面倒。

(無題) 削除/引用
No.5463-5 - 2016/10/12 (水) 13:27:27 - 初学者
私のラボでもペッスルでホモジナイズをしていました。
ハエを入れたエッペンチューブに、ペッスルでゴリゴリしたのちに、lysis bufferを加えていました。基本的にはLaemuli SDS Sample bufferを加えたのちに、boilをして、その上清をSDS-PAGEに用いていました。参考まで。

ハエではないですが 削除/引用
No.5463-4 - 2016/10/11 (火) 16:28:35 - ema
ハエではないですが、組織で2mlチューブで500ul-1ml液を入れてビーズ破砕して遠心回収して大量検体数を処理しています。
超音波は核酸断片化、パラフィン切片からの核酸回収等で使っていますが、ブランソンSonifier 250で水(水道水)循環は破砕能力が弱いですが、コバリス S2(ミリQ)は比較的強く破砕できます。

(無題) 削除/引用
No.5463-3 - 2016/10/11 (火) 00:21:03 - はえはえまん
あざまっす!4齢幼虫とは言わないんですねラボの人に怒らそうです。やっぱりペッスルになりますよねえ。あれは手が痛くなるので超音波を使いたかったんですが、無理そうですね。はい諦めます。

(無題) 削除/引用
No.5463-2 - 2016/10/10 (月) 16:23:31 - AP
関係ないけどハエの幼虫で四齢まである種があるのだろうか。
全ての種は三齢までだと思ってたけれど。

昆虫や組織は細胞や細菌と違いますから超音波だけで破砕するのは無理でしょう。ペッスルでホモジナイズすべきでは。

ハエ4齢幼虫の超音波処理の方法 削除/引用
No.5463-1 - 2016/10/10 (月) 09:51:28 - はえはえまん
いつも勉強させてもらってます。
ハエの4齢幼虫をライシスバッファーで可溶化させたいんですが、その時超音波処理を使おうと思ってます。この超音波の機械は専用の液体に、サンプルを入れたエッペンチューブを入れ、それをなぞの液体に浮かせて超音波処理するというもので、金属製のホーン的なものをサンプルチューブに差し込み超音波を当てるものとは違います。

ただあまりタンパク質が上清にこないのか、超音波処理が正しく行われてるか謎です。
1.5mlのエッペンチューブにサンプルを1mlも入れるのではキャパが大き過ぎてしまいますか?
これがもし細胞や大腸菌ならトリパンブルーや鏡顕下で調べられるのですが、ハエの場合、ホモジナイズの効果を調べるのは定まってません。。容量が多過ぎると超音波はかかりにくいですか?

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