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(無題) 削除/引用 No.5479-4 - 2016/10/17 (月) 21:31:43 - １q２w３えr４t５６y７う８い このマ―カーはECLでは検出できませんので、見えなくてよいのです。ECLの撮影後に、通常の写真撮影に切り替えれば膜の写真が撮影出来るので、このデータとECLのデータをマージすれば、マ―カーをECLデータに取り込んだ画像が得られます。非常に簡単にできます。使用説明書にあるとおもいますが、あるいはメーカーに聞けばやり方を教えてくれます。抗体によってはたまにいくつかのマ―カーが検出されるものがありますが、あくまでもその抗体とマ―カー蛋白質の間でたまたま親和性があったからで、本来は検出されません。 マ―カーのシグナルをECLで同時に検出したいならば、それ用の標識した特殊なマ―カーを購入して使用する必要がありますが、上記のような手順でマ―カーとの照合ができるので、私たちは使っていません。

(無題) 削除/引用 No.5479-3 - 2016/10/16 (日) 19:18:30 - AP マーカーはHR標識されていないのだからケミルミで見えないのは当然ではないの。交差反応でマーカーが光ることはあるけど、それとは本来のつかいかたじゃないし、光ってしまうと標的の弱いシグナルに被ってしまったりしてかえって迷惑。 一般的には、暗箱内でケミルミを撮像してから、暗箱の扉を開けたり内部照明をあててマーカー像をとり、両像を重ね合わせて標的のサイズを見る。ケミルミ撮像システムには重ね合わせの機能が組み込まれているものが多い。

(無題) 削除/引用 No.5479-2 - 2016/10/16 (日) 19:08:23 - おお そのマーカは確かECLとか（ケミルミ）では検出できないとおもいました。単なるプレステインのマーカーはECL反応まえかあとにメンブレンの位置を変えずに明視野（ランプなどをつけた状態）で撮影して、レイヤー機能などを使って位置を確認するものだと思ってます。 もしケミルミ対応なら加える抗体など（物によってはアビジンHRPとか）適切な検出方法で検出しているのか確認してください。

WBでマーカーのみシグナル検出できません。 削除/引用 No.5479-1 - 2016/10/16 (日) 18:47:39 - FT 基本的な問題で申し訳ありませんが、どなたかお分かりになれば教えてください。 マウス脳から抽出したサンプルを用いて、WBでHSP70の定量を行っています。 ラビット由来の1次抗体を用いて、2次抗体はHRP標識の抗ラビット抗体を用いています。SDSで分子マーカーはきれいに分離移動しており、メンブレンにもきちんと転写されていますが、CCDカメラで撮影するとサンプルのシグナルはありますが、マーカーは写りません。（サンプルは直視ではマーカーが見えるので、HSP70の分子量のところに、メンブレンに切り込みを入れて撮影すると、その位置にバンドが1本のみ出ていてきちんと標的タンパクは検出されているようにも思われます。分子マーカーはBioradのdual colorのものを使用しています。

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