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(無題) 削除/引用 No.5576-4 - 2016/11/28 (月) 09:36:35 - ゆっき おお様 ありがとうございます。 Nのプロトコール見ました。 未固定、固定でDHE染色の差はやはり確認しなければいけませんね。 DHE染色後の免染、DHE輝度はおそらく下がるとは思うのですが、これまた試して見ないと何ともですね。 実際、局在検討のための二重染色しているのは検索しても２つしか見当たらないので（連続切片での検討はありますが）、論文がないのには何か理由があるのかとも考えています。

(無題) 削除/引用 No.5576-3 - 2016/11/27 (日) 17:10:41 - おお 固定後の免疫染色をやっているプロトコールはありますか？Mitosoxなど同類のものは固定しても蛍光プローブは固定されないようです。洗っているうちに流れ出たりしないかな。。。

(無題) 削除/引用 No.5576-2 - 2016/11/27 (日) 16:46:43 - おお ttp://www.nature.com/protocolexchange/protocols/414#/procedure ハエのプロトコールですが染色後固定とかいてます。ただし固定後のイメージが固定前の染色状態を維持しているか確かめろと書いてます。 凍結ごのサンプルの染色も（経験はありませんが）トリッキーじゃないかと思うのですが、なので凍結しないサンプルで確認したいところですが、、、切片作れないですよね、、、そのへんはまた調べてみます。

Dihydroethidium(DHE)染色 削除/引用 No.5576-1 - 2016/11/27 (日) 11:31:48 - ゆっき お世話になります。 酸化ストレス（ラジカル)検出で頻用されている、DHE染色について相談です。 組織局在をみるため、二重染色が必要になりました。 マウス組織in situで検出する場合未固定の凍結切片を用いることがほとんどですが、調べた範囲ではホルマリンで軽く固定後にDHE染色して、以後目的の抗体で染色しているのが、稀にありました。 ラジカル自体不安定だと思うのですが、固定してDHE染色もしくはDHE染色して固定後、以後普通に免疫染色は可能なのでしょうか。 どなたか経験のある方がいましたら、教えていただければと思います。 よろしくお願いします。

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