Bio Technical フォーラム

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細胞染色 トピック削除
No.56-TOPIC - 2012/01/19 (木) 13:53:52 - GFP
こんにちは。

現在, EGFP融合タンパク質を用いて細胞内局在性の分析を行う予定です。
そこで, 核または細胞質を染色できるような蛍光染色試薬を探しているの
ですが, 一般的にどのような物が用いられているのでしょうか？
用いる細胞はsf-9またはsf-20です。
　
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(無題) 削除/引用
No.56-7 - 2012/01/20 (金) 10:21:16 - Jin
sf-9またはsf-20とか、immunocytochemistoryとか
適当な単語を入れてPubmedで検索

みつからなければ、検索の範囲を広げる。
ついでに実験とか染色のマニュアル系の本もどこかで探す。

読む。

使えそうな試薬を探す。
方法がはしょられてたら、メーカーのサイトからPDFをダウンロードする。

読む。

とりあえずやってみる。(ラボに試薬があるのなら)

ダメだったら何がダメだったのか考える。

この繰り返しです。

ここまでやって生じた具体的な疑問には、
その方面に明るい方々も答え易く、また建設的な議論ができるはずです。

(無題) 削除/引用
No.56-6 - 2012/01/20 (金) 07:41:35 - GFP
>PP, JIN様
御尤もで御座います。ある程度論文は探しているのですが, 染色の過程を
飛ばしている論文が多く, 中々見つかりません。論文を探すコツなどはある
のでしょうか。

>名無し様
観察する目的タンパク質は, 大腸菌で作成した遺伝子ベクターです。
NLS及び膜透過ペプチドの性質を調べるためにEGFPで標識してsf9細胞
に接種し, 局在性を分析しようとしています。そこで細胞内を染色し
ようと思った次第です。ですので、目的タンパク質はヨトウガ由来で
はありません。貴重なご意見, 参考にさせて頂きます。

>Harmonia
Hoechstであればラボにあるはずなので試してみたいと思います。
ご意見ありがとうございます。


皆様, 今回は勉強不足の私に付き合って頂き有り難うございます。
今後このような事が無いように精進していきたいと思います。
ご迷惑お掛けしました。

(無題) 削除/引用
No.56-5 - 2012/01/19 (木) 20:53:08 - Harmonia
MitoTracker とか Mitomarker とか呼ばれるものの赤色とPI の赤色。
UV 抗原を持っているならDAPIとかHoechst の何番かの緑とかぶらないヤツ。
No.56-4 で示唆されているベクター系なら、Clontech の局在シリーズ。

(無題) 削除/引用
No.56-4 - 2012/01/19 (木) 16:28:21 - ~
ここで「最近は蛍光色素染色ではなく、YFP-actinとNLS-DsRedの共発現系で見るのが一般的ですよ。」と書いたら構築してくれるのでしょうか。
作って配ると、喜ばれるかもしれません。


また、目的は、ヨトウガ細胞内での目的タンパク質の局在でいいのでしょうか？
一般的には物取りに使われる細胞だと思いますが。

目的タンパク質がヨトウガ由来であればいいのですが、そうでなければendoの状態を反映していないのではないかという突っ込みに反論できるデータも用意した方がいいでしょう。
哺乳類由来の遺伝子を評価する場合、N型糖鎖の欠損の影響も言われるかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.56-3 - 2012/01/19 (木) 14:50:59 - Jin
まず論文を読みましょう。
試薬の選択から染色の方法に至るまで全てここで質問して実験なさるおつもりですか？

(無題) 削除/引用
No.56-2 - 2012/01/19 (木) 14:07:28 - PP
まず、自分でどんなことを調べたのか聞きたいですね。

ため息が出ます。

細胞染色 削除/引用
No.56-1 - 2012/01/19 (木) 13:53:52 - GFP
こんにちは。

現在, EGFP融合タンパク質を用いて細胞内局在性の分析を行う予定です。
そこで, 核または細胞質を染色できるような蛍光染色試薬を探しているの
ですが, 一般的にどのような物が用いられているのでしょうか？
用いる細胞はsf-9またはsf-20です。
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