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GFPの種類 削除/引用 No.5663-7 - 2017/01/11 (水) 11:36:18 - ema mRNAレベルでなく、固定等でGFP（monoで光るもの以外）の光が低下することはよくあります。 自分で見るときもa-GFP抗体を付けないとはっきりしない事があるので、気になるならa-GFP抗体；赤とか別の波長での染色をして見ています。 ＞ライカのコンフォーカル フィルターを使わず、プリズムと可変式スリットで分光なので 完全じゃないですが、スリットを狭くして波長を区切ることができます。

(無題) 削除/引用 No.5663-6 - 2017/01/11 (水) 04:12:51 - おお >GFPとFITCを微妙な差の蛍光波長から分離する ライカのコンフォーカルも両者の波長特性からどっちのシグナルがどの程度でとか分析できるらしいですけど、このような方法論でどの程度精度が出せるんでしょうかねぇ。。。 まあともかく、実験デザインの段階で考える話で、しかもネガティブコントロールがなくて結論も出せないのは教訓として次回に活かしてもらいたいですねぇ。。。

(無題) 削除/引用 No.5663-5 - 2017/01/10 (火) 12:48:32 - 2017 GFPとFITCを微妙な差の蛍光波長から分離するフローはあるはずですよ。ソニーがだしていたっけ。

(無題) 削除/引用 No.5663-4 - 2017/01/10 (火) 11:50:43 - AP それだけの情報じゃ直感だけでも5つや6つのストーリーが考えられるわ。 それと、ノックアウトでmRNA分解って、、？

タイトル 削除/引用 No.5663-2 - 2017/01/10 (火) 11:23:44 - 774R それだけの情報では判断できないので、その論文のタイトル、またはPubMed IDを教えてください。

IRES-GFPの発現 削除/引用 No.5663-1 - 2017/01/10 (火) 11:02:43 - ami みなさまの知恵をおかしください。 論文を読んでいて目的の遺伝子のゲノム配列の途中6000bp程度をIRES-GFPに置換したノックアウトマウスの作成が書かれていたのですが、その後このノックアウトマウスから単離した細胞をFITCで染色して細胞表面のレセプターの発現をチェックしていました。 皆様にお聞きしたいのはこのノックアウトマウスにおいて目的遺伝子の発現している細胞においてGFPを発現しているのか？ということです。GFPが発現していたらFITCで染色もできないはずだと思ったのですが。 ノックアウトされているということは目的遺伝子-IRES-GFPのmRNAも分解されておりGFPは発現していないのでしょうか？調べてみてもこのようなノックアウトマウスでGFPの発現をチェックしている論文が見つからず気になったので投稿させていただきました。 よろしくお願いいたします。

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