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金属表面での培養 トピック削除
No.5668-TOPIC - 2017/01/12 (木) 13:15:05 - にっぐ
金属表面で培養した細胞にALP assayを行うために,細胞溶解液を入れて溶かしているのですが,どうもうまく溶けているような気がしません.
実際に実験を行ったところALPはあまり検出されず,文献と比較すると少し疑問が残る結果です.細胞溶解液が金属に何か干渉を起こしている可能性はあるのでしょうか.何かご存知の方がいらっしゃいましたら,教えていただきたいです.
ちなみに,RIPAとTriton]どちらも使いました.
 
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(無題) 削除/引用
No.5668-3 - 2017/01/12 (木) 14:46:53 - おお
骨細胞とかESとか分化に伴ってかなり変動するようだから、培養中に分化したとか、お手元にある細胞がすでに変化してしまっている可能性もあるのでは?

例えばTriton X-100なんかは非イオン性ですし、金属と相互作用するとは思えませんし。金属を激しく腐食するほどのものは溶解でつかうとは思わないんだけどなぜまく溶けているような気がしないのか理由はなんですか?タンパク量が予想したより少ないのですか?もし溶解して回収した後その金属の上に活性が残っているなら、その金属の上に反応溶液をかけてみたらどうですか?

コントロール 削除/引用
No.5668-2 - 2017/01/12 (木) 13:25:43 - 774R
>うまく溶けているような気がしません.

このような曖昧な状態から脱却するために、細胞が溶ければ必ず検出されるはずのもので評価してみます。私なら。
金属表面での培養と通常の培養ディッシュで比較もします。

金属による影響は知りませんが、その可能性を疑っていて、その答えをここで得ようと思うなら金属の種類くらいは書きます。私なら。

金属表面での培養 削除/引用
No.5668-1 - 2017/01/12 (木) 13:15:05 - にっぐ
金属表面で培養した細胞にALP assayを行うために,細胞溶解液を入れて溶かしているのですが,どうもうまく溶けているような気がしません.
実際に実験を行ったところALPはあまり検出されず,文献と比較すると少し疑問が残る結果です.細胞溶解液が金属に何か干渉を起こしている可能性はあるのでしょうか.何かご存知の方がいらっしゃいましたら,教えていただきたいです.
ちなみに,RIPAとTriton]どちらも使いました.

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