Bio Technical フォーラム

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プロテオーム解析におけるトリプシン処理 トピック削除
No.5687-TOPIC - 2017/01/18 (水) 22:33:16 - TE
お詳しいかたご教授ください。

生体から得られたサンプルをあるタンパク質Aの抗体で免疫沈降し、たんぱく質Aと相互作用しているタンパク質をLC/MS/MSにて網羅的に解析しようと試みています。

免疫沈降後のサンプルを冷アセトンにより、500mMTEAB溶液(1M尿素)に置換し、還元およびシステインブロックを行いました。このサンプルにトリプシンを添加したところ、白濁しました。

初めてこの実験を行ったため、本来どうなるのかわからないのですが、トリプシンが凝固しているように思います。
それともこれで良いのでしょうか。白濁するものなのでしょうか。。

原因を含めてご教授いただけると幸いです。
よろしくお願い致します。
 
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プロテオーム解析におけるトリプシン処理 削除/引用
No.5687-1 - 2017/01/18 (水) 22:33:16 - TE
お詳しいかたご教授ください。

生体から得られたサンプルをあるタンパク質Aの抗体で免疫沈降し、たんぱく質Aと相互作用しているタンパク質をLC/MS/MSにて網羅的に解析しようと試みています。

免疫沈降後のサンプルを冷アセトンにより、500mMTEAB溶液(1M尿素)に置換し、還元およびシステインブロックを行いました。このサンプルにトリプシンを添加したところ、白濁しました。

初めてこの実験を行ったため、本来どうなるのかわからないのですが、トリプシンが凝固しているように思います。
それともこれで良いのでしょうか。白濁するものなのでしょうか。。

原因を含めてご教授いただけると幸いです。
よろしくお願い致します。

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