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アセトアルデヒド固定によってなんで細胞は光る? トピック削除
No.5703-TOPIC - 2017/01/24 (火) 00:44:32 - はっと
こんにちは、
今年から血液を使った細胞実験を始めた、大学生です。
実験で培養した細胞(主に血小板)を観察する際にアセトアルデヒドを使って固定しています。
観察は蛍光顕微鏡を使っているのですが、蛍光色素をつけていなくても、血小板が光ります。

これはアセトアルデヒドが強くて、血小板内部の構造が壊れてそれが自家蛍光によって光っているのでしょうか?

初歩的な質問ですみません。
よろしくお願いします。
 
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No.5703-8 - 2017/01/25 (水) 10:30:00 - AP
>自家蛍光が強くなるメカニズムは今調査中ですので、分かり次第ご連絡します。

おおさんのあげてくれた資料とそこに引用されてある文献にさっくりとは書いてありますけれど。グルタルとタンパク質やアミンが結合すると蛍光性の産物ができる、くらいのざっくりですが。

あと、多量体化して組織に結合しているグルタルにフリーのアルデヒドが残っていてそれに検出用の抗体などが結合する場合もあるとか。

対処法についても上記資料に載っていますけど、参考になりませんか?

(無題) 削除/引用
No.5703-7 - 2017/01/24 (火) 23:02:01 - はっと
みなさま、はっとです。
短い期間にこんなにお返事いただきありがとうございます。
質問内容が間違っていました
アセトアルデヒドではなく、使っていたのはグルタールアルデヒドです。すみません。

グルタールは細胞と反応することで自家蛍光を強める作用があり、
その方法を使った細胞の蛍光観察法は次のように呼ばれているみたいです。
The glutardialdehyde induced fluorescence technique (GIFT)
参考URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/m/pubmed/10951378/

自家蛍光が強くなるメカニズムは今調査中ですので、分かり次第ご連絡します。
よろしくお願い致します。

(無題) 削除/引用
No.5703-6 - 2017/01/24 (火) 15:38:27 - o
pletelets とautofluorescenceでGOOGLE検索するといろいろ出てくるので、とりあえず読んでみて下さい。たぶん疑問は解決すると思います。

(無題) 削除/引用
No.5703-5 - 2017/01/24 (火) 09:31:45 - おお
アセトアルデヒドの部分は見落としてましたね。。。通常はPFA(ホルムアルデヒド、ホルマリン)とかグルタルアルデヒドですね。グルタルアルデヒドは蛍光が出やすいそうですから、本当にアセトアルデヒドを使ってるんだったらPFA(ホルムアルデヒド)で試してもいいかもしれませんよ。

(無題) 削除/引用
No.5703-4 - 2017/01/24 (火) 09:30:58 - o
分子間の架橋で生じる化学構造のうち蛍光を呈するものがあると聞きました。血小板だとα顆粒?みたいにいろんなものを貯蔵してる袋があるのでその中のものが光るのかもしれない。

(無題) 削除/引用
No.5703-3 - 2017/01/24 (火) 07:46:52 - AP
固定剤としてアセトアルデヒドを使うことがあるんですか。
どんな特長があるんでしょう。

(無題) 削除/引用
No.5703-2 - 2017/01/24 (火) 05:33:47 - おお
内部の構造が壊れるのと蛍光がどう結びつくかわかりませんけど、、、
アルデヒドの反応自体が蛍光物質生成に関与しているようです。
http://wwwfacilities.uhnresearch.ca/wcif/PDF/Autofluorescence.pdf
http://web.qbi.uq.edu.au/microscopy/autofluorescence/

アセトアルデヒド固定によってなんで細胞は光る? 削除/引用
No.5703-1 - 2017/01/24 (火) 00:44:32 - はっと
こんにちは、
今年から血液を使った細胞実験を始めた、大学生です。
実験で培養した細胞(主に血小板)を観察する際にアセトアルデヒドを使って固定しています。
観察は蛍光顕微鏡を使っているのですが、蛍光色素をつけていなくても、血小板が光ります。

これはアセトアルデヒドが強くて、血小板内部の構造が壊れてそれが自家蛍光によって光っているのでしょうか?

初歩的な質問ですみません。
よろしくお願いします。

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