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Bisulphite sequencing トピック削除
No.5718-TOPIC - 2017/01/30 (月) 10:03:54 - Ox
平素よりお世話になっております。

培養後、ある細胞群の特定のDNA脱メチル化を調べるためにBisulphite sequencingをお願いしたところ、ほぼ0%と出ました。
その後、もし脱メチル化が起こっているとするならばその細胞群の中でも少数のsubset(約1〜2%) だけなのではということに気づき、その細胞群をFACSでsortingしてからまたbisulphite sequencingに出そうと思うのですが、全体で0%と出ているのにこれは意味があることなのでしょうか?

Bisulphite sequencingにおいてPCR40サイクルするのはわかっているのですが、それがどのくらいの感度なのかわかりません。

よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.5718-4 - 2017/01/30 (月) 20:30:27 - Hisa
CDさん> ありがとうございます。 ソートしてからもう一度試してみることにします。

おおさん>はい。検出限界が知りたいです

(無題) 削除/引用
No.5718-3 - 2017/01/30 (月) 12:14:36 - CD
>ほぼ0%と出ました

古典的なバイサルファイトシーケンスをしたのだとしてですが、感度は拾ったクローン数によるのでは?
なのでBulkで0%だとしてもソート後の細胞群なら100%ということは有り得る。

とあるサブセットでのみ脱メチル化が起きているなら、各サブセットごとに分けて実験したほうがより説得力のあるデータになるように感じます。

(無題) 削除/引用
No.5718-2 - 2017/01/30 (月) 10:41:28 - おお
要するに検出限界が知りたいのですか?

Bisulphite sequencing 削除/引用
No.5718-1 - 2017/01/30 (月) 10:03:54 - Ox
平素よりお世話になっております。

培養後、ある細胞群の特定のDNA脱メチル化を調べるためにBisulphite sequencingをお願いしたところ、ほぼ0%と出ました。
その後、もし脱メチル化が起こっているとするならばその細胞群の中でも少数のsubset(約1〜2%) だけなのではということに気づき、その細胞群をFACSでsortingしてからまたbisulphite sequencingに出そうと思うのですが、全体で0%と出ているのにこれは意味があることなのでしょうか?

Bisulphite sequencingにおいてPCR40サイクルするのはわかっているのですが、それがどのくらいの感度なのかわかりません。

よろしくお願いします。

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